トランスポーターの活性と発現量に基づくｉｎ ｖｉｖｏ肝クリアランス予測法の検証

基于转运蛋白活性和表达水平的体内肝脏清除率预测方法的验证

• 批准号: 19K16468
• 负责人: 小山 智志
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2020-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K16468/
• 关键词: 肝臓; 薬物トランスポーター; RAF; REF; IVIVE; 肝取り込み; 胆汁排泄

薬物の体内動態を正確に予測するためには、肝臓に発現するトランスポーターのin vivoにおける機能を正確に見積もることが不可欠である。In vitro-In vivo補外（IVIVE）の方法論には、特異的基質のトランスポーターによる輸送活性を用いるRelative Activity Factor（RAF）法、トランスポーターの発現量を用いるRelative Expression Factor（REF）法が挙げられる。本研究では、肝取り込みクリアランスや胆汁排泄の固有クリアランス予測におけるRAF法、REF法の有用性や限界を明らかにすることを目的として検討をおこない、以下の知見を得た。１）HEK293細胞発現系とヒト肝細胞を用いたRAF法によるOATP1B1、OATP1B3の基質薬物の肝取り込みクリアランスの予測は、比較的良好に実測値を再現した。REF法による予測では、RAF法と比較してOATP1B1の寄与が小さかった。２）ヒト肝細胞および肝臓ブロックより抽出した薬物トランスポーターの発現量は、HomogenateとCrude Membrane画分を用いた場合に良好な相関を示した。一方で、Plasma Membrane画分を用いた結果はHomogenateやCrude Membrane画分と異なる値を示すものもあった。３）MDCKII細胞発現系とヒト肝細胞を用いたREF法によるBCRP、MRP2、MDR1等の基質薬物の胆汁排泄クリアランスの予測は、肝細胞や臨床試験の実測値と大きく外れた結果が得られた。REF法による予測が外れた原因としては、以下のような可能性が考えられる。（１）排泄型トランスポーター固有の活性がMDCKと肝細胞で異なる。（２）排泄型トランスポーターの細胞膜への移行がMDCKと肝細胞で異なる。（３）脂質ラフトの性質がMDCKと肝細胞で異なる。

为了准确预测肝表达转运蛋白的体内功能至关重要。体内外推（IVIVE）方法论包括使用转运蛋白转运蛋白转运蛋白转运蛋白转运蛋白的相对活性因子（RAF）方法，以及使用转运蛋白表达水平的相对表达因子（REF）方法。进行这项研究的目的是阐明RAF和REF方法在预测肝脏吸收和胆汁排泄的固有清除率时的实用性和局限复制。与RAF方法相比，REF预测显示OATP1B1的贡献较小。 2）从人肝细胞和肝阻滞中提取的药物转运蛋白的表达水平在使用匀浆和粗膜分数时显示出良好的相关性。另一方面，使用质膜分数的某些结果显示出与匀浆和粗膜级分的值不同。 3）使用MDCKII细胞表达系统和人类肝细胞的BCRP，MRP2，MDR1等基板药物的胆汁排泄清除率与在肝细胞和临床试验中测得的实际值显着不同。以下是REF方法失败的可能原因。 （1）分泌转运蛋白的内在活性在MDCK和肝细胞之间有所不同。 （2）分泌物转运蛋白向细胞膜的转移在MDCK和肝细胞之间有所不同。 （3）MDCK和肝细胞之间脂质筏的特性不同。