小脳プルキンエ細胞が独特の形態の樹状突起を形成するin vivoでの分子機構

小脑浦肯野细胞形成独特形状树突的体内分子机制

• 批准号: 19K16279
• 负责人: 佐竹 智子
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K16279/
• 关键词: プルキンエ細胞; 樹状突起; 遺伝子改変マウス; In Utero Electroporation; アイソフォーム; 微小管

今年度は、前年度に単離したマウス小脳に発現する2つのMTCL2のアイソフォームが、プルキンエ細胞に発現しているのかを調べた。そのために、野生型マウス(WTマウス)、プルキンエ細胞特異的MTCL2ノックアウトマウス(cKOマウス, exon 14を欠損)の小脳からcDNAを調製し、MTCL2の各アイソフォームを特異的に増幅するプライマーを使った定量PCRを行った。その結果、全長のMTCL2の発現はWTおよびcKOに差は無かったが、exon 5-15からなるアイソフォーム(アイソフォーム1)とexon 12-15からなるアイソフォーム(アイソフォーム2)は、cKOでの発現が明らかに少なかった。このことから、MTCL2のアイソフォーム1と2が、プルキンエ細胞で発現していると結論付けた。同定したMTCL2のアイソフォーム1と2が、プルキンエ細胞の平面状の樹状突起の形態形成に関わるのかを検証する実験には着手できなかった。アイソフォーム1と2以外にも、小脳に発現するMTCL2のアイソフォームがあるかを探索した結果、exon1-5からなるアイソフォーム3を同定した。興味深いことに、アイソフォーム3はMTCL2のexon 14を欠損したノックアウトマウス(KOマウス)の小脳で、完全に発現が消失していた。これは、MTCL2遺伝子では、exon 14がMTCL2遺伝子自体の発現の制御に関与していることを示唆する結果である。加えて、MTCL2のexon 5を認識する抗体を用いたWTとKOマウスの小脳切片の免疫染色の結果から、アイソフォーム3は小脳のバーグマングリア細胞に特異艇に発現していると考えられた。

今年，我们检查了在Purkin -Chin细胞中表达的两种MTCL2同工型是否施加在上一年分离出的小鼠小脑中。因此，从野生型小鼠（WT小鼠），purkin -e -e -cell-特异性mtcl2敲除小鼠（Misson 14）中制备cDNA的底漆，并特别放大了MTCL2的每个同工型。 。结果，WT和CKO之间的总长度MTCL2的表达没有差异，但是外显子5-15（同工型1）和外显子12-15（同工型2）的表达显然很小。这得出的结论是，MTCL2同工型1和2在Purkin -E细胞中表达。不可能检查发现已鉴定的MTCL2同工型1和2是否参与形成普鲁蛋白细胞的平坦样品。除了搜索小脑中表达的MTCL2同工型的结果外，还确定了Exon1-5。有趣的是，同工型3是敲除小鼠（KO小鼠）的小脑，它缺少MTCL2的外显子14，完全消失了。这是MTCL2基因的结果，表明外显子14参与了MTCL2基因本身表达的控制。此外，使用抗体识别MTCL2外显子5的抗体的WT和KO小鼠的免疫染色的结果表明，同工型3在小脑的勃argmangrian细胞的特殊船中表达。