子宮内膜菲薄化モデルマウスに対するPDE5阻害薬の効果と作用機序の解明

阐明PDE5抑制剂对子宫内膜变薄模型小鼠的作用及其机制

基本信息

批准号：
20K18164
负责人：
西岡美喜子
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Mie University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2023-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

生殖補助医療では、体外受精技術が飛躍的に進歩した一方で、体外受精後子宮内に胚移植した後の妊娠率は30％程度に止まっており改善に乏しい。我々は着床不全や不育症の中でも、子宮内膜発育不全症に対する治療法の開発を目指して、血流改善効果が報告されているPhosphodiesterase(PDE)5阻害薬のTadalafilに着目した。本研究では、エタノール注入による子宮内膜発育不全モデルマウスの作成法を確立し、Tadalafilの投与により子宮内膜が肥厚化するかを確認し、その理由として子宮内膜での血流改善効果と炎症性macrophageへの抗炎症作用が影響しているかを確認する。そしてその際の着床・妊娠率を検討する事で、妊娠の成立維持における知見を得ると共に、新規治療法の創出を目指す。モデルマウスは外科的に子宮の卵巣側両側と膣を専用クリップで止め、30G針で95%エタノール溶液を子宮内に直接投与して5分間静置したのちにPBSで洗浄した。その結果2、4、6週と経時的に、子宮サイズが縮小すると共に、内膜上皮細胞は消失し間質細胞で充填された。次にモデルマウスにTadalafil投与を2、4週と継続して投与した所、内膜上皮細胞は認められず、多数の血管新生が認められた。今後は血流改善効果を確認するため、血管新生マーカーとしてVEGFR2、血流改善に関与する因子である酸化ストレスのマーカー8-OHdGを、低酸素誘導因子マーカーとしてHIF1αとHIF2α発現を確認する。加えて細胞の増殖とマクロファージの局在を確認するため、Ki67とF4/80についても免疫染色を進めている。

在辅助生殖技术方面，虽然体外受精技术取得了巨大的进步，但体外受精后胚胎移植到子宫后的妊娠率仍停留在30%左右，改善甚微。我们重点关注磷酸二酯酶 (PDE) 5 抑制剂他达拉非，据报道它具有改善血流的作用，目的是开发治疗子宫内膜发育不全（一种植入失败和不孕症）的方法。在本研究中，我们建立了通过注射乙醇建立子宫内膜发育不全小鼠模型的方法，并确认服用他达拉非是否会导致子宫内膜增厚，并确认其抗炎作用是否会影响炎症巨噬细胞。通过检查当时的植入率和妊娠率，我们的目标是获得有关建立和维持妊娠的知识并创造新的治疗方法。在模型小鼠中，用特制的夹子手术固定卵巢两侧的子宫，并用30G针头将95%乙醇溶液直接注入子宫，静置5分钟，然后冲洗与PBS。结果，随着时间的推移，在第 2、4 和 6 周，子宫尺寸减小，子宫内膜上皮细胞消失并被基质细胞充满。接下来，当他达拉非连续给予模型小鼠2至4周时，没有观察到内膜上皮细胞，并且观察到大量血管生成。今后，为了确认改善血流的效果，我们将确认作为血管生成标志物的VEGFR2、作为参与改善血流的因素的氧化应激标志物8-OHdG、以及HIF1α和HIF1α的表达。 HIF2α 作为缺氧诱导因子的标志物。此外，我们正在进行 Ki67 和 F4/80 的免疫染色，以确认细胞增殖和巨噬细胞定位。