インスリン抵抗性惹起因子レジスチンを高発現する新たな単球サブタイプの統合的解明

综合阐明高表达胰岛素抵抗诱导因子抵抗素的新单核细胞亚型

基本信息

批准号：
20K16523
负责人：
池田陽介
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K16523/
关键词：
単球マクロファージレジスチンインスリン抵抗性糖尿病

项目摘要

本研究では、単球・マクロファージのサブタイプ別にレジスチン遺伝子発現・機能解析を行い遺伝子・環境因子相互作用を明らかにする。①患者/対照において、単球・マクロファージのサブタイプ別にレジスチン遺伝子発現を比較する。②一般住民において、SNP-420の遺伝子型が、各サブタイプでの発現に及ぼす影響を解明する。③患者in vivoならびに単離したサブタイプの細胞in vitroにおいて、環境因子の影響を明らかにする。以上を統合し、レジスチンの発現細胞を焦点に、炎症とインスリン抵抗性をリンクするメカニズムを解明し、新規分子標的の同定に繋げる。「目的1. 単球・マクロファージのサブタイプ別にレジスチン遺伝子発現を比較する」について、2型糖尿病患者50名、耐糖能正常ボランティア50名から血清を採集し、ELISA法で血中レジスチン濃度を測定する。「目的2. レジスチンSNP-420の遺伝子型が各サブタイプに及ぼす影響を明らかにする」について、一般住民約2000名において、血中レジスチンは測定済みで、血清・RNAも既に収集し、レジスチンSNP-420はTaqMan法でタイピングした。この中の約100名をレジスチンSNP-420のC/C型、C/G型、G/G型に分ける。単球・マクロファージのサブタイプ毎に、レジスチン遺伝子発現をRT-PCR法で測定し、細胞抽出液中のレジスチン蛋白は高感度ELISA法で測定する。「目的3. 環境因子が各サブタイプに及ぼす影響を解明する」について、2型糖尿病患者50名において、教育入院期間である2週間で、環境の変化が各サブタイプに及ぼす影響を解析する。2022年度は2型糖尿病患者の検体採取方法についての準備を進めた。耐糖能正常ボランティアの検体を使用してフローサイトメトリーによる単球サブタイプ分類の手技の見直しを行っている。

在本研究中，我们将分析单核细胞和巨噬细胞每种亚型的抵抗素基因表达和功能，以阐明基因与环境因素之间的相互作用。 ① 比较患者/对照中单核细胞/巨噬细胞亚型的抵抗素基因表达。 ②阐明SNP-420基因型对普通人群中各亚型表达的影响。 ③阐明环境因素对患者体内及体外分离的亚型细胞的影响。通过整合上述内容，我们将阐明炎症和胰岛素抵抗之间的联系机制，重点关注表达抵抗素的细胞，并将导致新分子靶点的鉴定。对于“目标1.比较单核细胞和巨噬细胞亚型的抵抗素基因表达”，从50名2型糖尿病患者和50名具有正常糖耐量的志愿者收集血清，并使用ELISA测量血液抵抗素浓度。关于“目的2.为了明确抵抗素SNP-420基因型对各亚型的影响”，对约2000名普通居民进行了血液抵抗素测定，并采集了血清和RNA，并测定了抵抗素SNP-420基因型。使用 TaqMan 方法输入 420。其中大约100个将被分为抵抗素SNP-420类型C/C、C/G和G/G。将使用 RT-PCR 测量单核细胞和巨噬细胞每种亚型的抵抗素基因表达，并使用高灵敏度 ELISA 测量细胞提取物中的抵抗素蛋白。关于“目标3.阐明环境因素对各亚型的影响”，我们将分析50名2型糖尿病患者在为期2周的教育住院期间环境变化对各亚型的影响。 2022财年，我们就如何采集2型糖尿病患者的标本进行了准备。我们正在审查使用来自正常耐糖志愿者的样本通过流式细胞术对单核细胞亚型进行分类的技术。