がん微小環境の制御による腫瘍細胞の分化転換

通过控制癌症微环境实现肿瘤细胞的转分化

• 批准号: 20K16369
• 负责人: 原田 大史
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: University of Occupational and Environmental Health, Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K16369/
• 关键词: 細胞の分化転換; がん微小環境; 培養細胞の確保; 初代・継代培養; 研究機器の修理; 分化転換; オートファジー; 低酸素培養; 無血清培養

ヒト子宮平滑筋腫の細胞を採取して、初代・継代培養して研究に使用するための細胞を増殖した。プライマリの培養細胞のため細胞の増殖した。次の実験段階として低酸素培養と無血清培養を併用し、βカテニン阻害剤あるいはROCK阻害剤などの蛋白阻害剤を併用することで分化転換を起こす過程が必要となり、分化転換に必要な培養液や実験に使用する消耗品を購入するなどの準備を行った。培養細胞にがん微小環境を模した細胞環境（低酸素・無血清）を用意し、更に分化転換に必要な方向性を（特定の蛋白阻害剤を利用して）示し、細胞の性質変化を起こした。培養細胞の分化転換を示唆する形態変化については現時点で確認できているが、今後は形態変化に併せて、細胞内の遺伝子発現や蛋白発現の変化について確認する必要がある。がん微小環境を利用した細胞の分化転換の誘発を行い、分化転換した細胞の解析を行う過程にある。変化後の細胞に関して、細胞の形態変化（細胞骨格蛋白の変化を視覚的に証明）・免疫染色による蛋白の変化の確認・リアルタイムPCRや次世代型シーケンサーを利用した遺伝子変化の確認を行ったため、がん微小環境の機能との関連について検討する前段階に至っている。変化後の細胞に関して、細胞の形態変化（細胞骨格蛋白の変化を視覚的に証明）・免疫染色による蛋白の変化の確認・リアルタイムPCRや次世代型シーケンサーを利用した遺伝子変化の確認を行い、性質変化の証明を行うことになる。

收集人子宫肌瘤细胞并进行原代和传代培养以增殖细胞用于研究。原代培养细胞用于细胞增殖。作为下一步的实验步骤，需要采用低氧培养和无血清培养相结合的方式，通过使用β-catenin抑制剂或ROCK抑制剂等蛋白质抑制剂来诱导转分化，并需要并制备转分化所需的培养基。购买实验所用耗材等准备工作。我们在模拟癌症微环境的细胞环境（低氧和无血清）中制备培养细胞，然后向它们展示转分化所需的方向（使用特定的蛋白质抑制剂）以诱导细胞特性的变化。目前，我们已经确认了表明培养细胞转分化的形态变化，但将来除了形态变化之外，还需要确认细胞内基因表达和蛋白质表达的变化。我们正在利用癌症微环境诱导细胞转分化并分析转分化的细胞。对于变化后的细胞，我们确认了细胞形态变化（直观地显示细胞骨架蛋白的变化）、使用免疫染色的蛋白质变化以及使用实时PCR和下一代测序仪的遗传变化，我们已经达到了研究与变化的关系的初步阶段。癌症微环境的功能。对于变化后的细胞，我们进行了细胞形态变化（直观地展示细胞骨架蛋白的变化）、使用免疫染色的蛋白质变化以及使用实时PCR和下一代测序仪的遗传变化，以确定它们的特性。

项目成果

がん微小環境と分子標的薬の併用による腫瘍細胞の分化転換

癌症微环境与分子靶向药物相结合实现肿瘤细胞转分化

• 发表时间: 2022
• 作者: 原田 大史