破骨細胞に発現する免疫チェックポイント分子シグレック-15の機能と治療応用

破骨细胞表达的免疫检查点分子Siglec-15的功能及治疗应用

• 批准号: 21H03048
• 负责人: 高畑 雅彦
• 金额: $ 8.49万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H03048/
• 关键词: 破骨細胞; 免疫チェックポイント; シグレック; 末梢性免疫寛容誘導機構; 骨破壊; シグレック１５; 末梢性免疫寛容誘導; がん免疫; 自己免疫性関節炎; がん溶骨性骨転移; 慢性骨髄炎

初年度は主に破骨細胞膜上のシグレック-15によるT細胞活性抑制効果の検証を中心におこなった。野生型マウス由来骨髄マクロファージから分化させたシグレック１５を高発現する破骨細胞またはシグレック-15遺伝子欠損マウス由来骨髄マクロファージからII型コラーゲンコートディッシュ上で培養したシグレック１５発現のない破骨細胞を用いてT-cellとの相互作用実験を行った。マウスシグレック-15発現破骨細胞または非発現破骨細胞と細胞透過性色素CFDA-SEで蛍光染色したCD4+T (Th1, Th17)、CD8+T細胞を共培養したところ、T細胞の細胞増殖性には明らかな差は生じなかったものの、シグレック-15発現破骨細胞はT-cellからのサイトカイン（IFNγ, IL-17, IL-22）分泌量を減少させることがわかった。ヒト末梢血単球由来破骨細胞共培養系とヒトT-cellについても同様の実験を行い、破骨細胞由来のシグレック15はT細胞増殖性には明らかな変化を与えないが、T-cellからのサイトカイン分泌量を減少させ活性を抑制することを確認した。ヒト由来破骨細胞ではシグレック15遺伝子をノックダウンした細胞（単核破骨細胞）を用いた。２年目の目標であるin vivoでの検証の準備として、転移性骨がんのモデルはマウス乳癌細胞株E0771およびルイス肺がん由来細胞株を免疫不全マウス、野生型マウスおよびシグレック１５遺伝子欠損マウスに尾動脈経由で移植するモデルを作成中であり、免疫不全マウス以外ではモデルの最適化を行なっているところである。また、野生型マウスとシグレック１５遺伝子欠損マウスを用いて、アジュバント誘導関節炎をモデルを作成中である。

第一年，我们主要关注验证Siglec-15对破骨细胞膜抑制T细胞活性的作用。使用高度表达 Siglec-15 的破骨细胞，该破骨细胞与源自野生型小鼠的骨髓巨噬细胞或不表达 Siglec-15 的破骨细胞进行培养，并在 II 型胶原包被的培养皿上培养源自 Siglec-15 基因缺陷小鼠的骨髓巨噬细胞我们进行了与 T 细胞的相互作用实验。当表达Siglec-15的小鼠破骨细胞或不表达破骨细胞与CD4+T（Th1、Th17）和CD8+T细胞共培养时，用细胞渗透性染料CFDA-SE荧光染色，T细胞虽然没有明显的染色。增殖差异，发现表达 Siglec-15 的破骨细胞减少了 T 细胞分泌的细胞因子（IFNγ、IL-17、IL-22）的量。使用人外周血单核细胞来源的破骨细胞共培养系统和人T细胞进行了类似的实验，尽管破骨细胞来源的Siglec-15没有引起T细胞增殖的任何明显变化，但证实了其分泌。细胞中的细胞因子减少，其活性受到抑制。作为人源破骨细胞，使用了Siglec 15基因被敲低的细胞（单核破骨细胞）。为了准备第二年的体内验证目标，使用小鼠乳腺癌细胞系 E0771 和 Lewis 肺癌衍生细胞系在免疫缺陷小鼠、野生型小鼠和 Siglec-15 中开发了转移性骨癌模型我们目前正在创建一种通过尾动脉移植的模型，并正在优化该模型以用于免疫缺陷小鼠以外的用途。我们还使用野生型小鼠和 Siglec-15 基因缺陷小鼠创建佐剂诱导的关节炎模型。