Nobel RNA modification in bacteria and its pathophysiological significance

细菌中Nobel RNA修饰及其病理生理意义

基本信息

批准号：
21H02731
负责人：
富澤一仁
金额：
$ 11.07万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、1. 高次構造を有さないヌクレオシドを修飾する酵素は実在するのか？その酵素は何か？　2. 細菌における新規ヌクレオシドの修飾の意義は何か？　3 新規修飾ヌクレオシドが生理活性物質として機能するか？もし機能するなら受容体は何か？という問いに答える研究を実施している。今年度は、昨年度同定したm3A受容体の組織発現ならびに細胞内発現を定量PCR法ならびにウエスタンブロット法で同定した。その結果、胸腺やマクロファージなどの免疫組織や細胞、さらに腎臓に多く分布していることが分かった。腎臓での分布について、詳細な解析を行った結果、尿細管に多く分布していることが明らかになった。そこで、m3A受容体を多く発現しているヒト単球由来M1およびM2マクロファージを培養し、1 nMから1 microMの濃度でm3Aで処理した。処理1時間後にRNAを回収し、インターロイキンの発現についてqPCR法で検討した。その結果、m3Aは濃度依存的にインターロイキンの発現を促進することが明らかになった。さらにm3Aが細胞増殖やアポトーシスならびに細胞移動などには影響を及ぼすかWST-1アッセイ、TUNEL染色ならびに細胞遊走アッセイで検討した。その結果、m3Aは、細胞増殖やアポトーシスならびに細胞移動には影響を及ぼさないことが明らかになった。以上の結果より、m3Aはm3A受容体を介してマクロファージの免疫機能を促進することが明らかになった。

在这项研究中，1。是否有任何酶可以改变没有更高结构的核苷？那是什么酶？ 2。新型核苷在细菌中的重要性是什么？ 3。新的修饰核苷是否起生理活性物质的作用？如果有效，受体是什么？我们正在进行研究以回答这个问题。今年，通过定量PCR和Western印迹鉴定了去年确定的M3A受体的组织和细胞内表达。结果，发现它在免疫组织，胸腺和巨噬细胞以及肾脏中分布更广泛。对肾脏分布的详细分析表明，它在肾小管中更频繁地分布。因此，培养了大量表达M3A受体的人类单核细胞衍生的M1和M2巨噬细胞，并以1 nm至1 microM的浓度用M3A处理。治疗后1小时收集RNA，并通过QPCR方法检查白介素表达。结果，发现M3A以浓度依赖性方式促进白介素表达。此外，M3a对细胞增殖，凋亡和细胞迁移有影响，或者在WST-1分析，TUNEL染色和细胞迁移测定中进行了研究。结果表明，M3A对细胞增殖，凋亡或细胞迁移没有影响。以上结果表明，M3A通过M3A受体促进巨噬细胞的免疫功能。