The novel roles of microRNA biogenesis factors in DNA repair

microRNA生物发生因子在DNA修复中的新作用

基本信息

批准号：
21H02462
负责人：
谷口俊恭
金额：
$ 11.07万
依托单位：
Tokai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2026-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H02462/
关键词：
DNA修復紫外線 microRNA がん

项目摘要

本研究はmicroRNA生合成とDNA修復という二つの分野を結ぶ新しい研究領域の創生を目指している。紫外線(UV)はDNAを損傷し癌化を誘発する。UVによるDNA損傷はヌクレオチド除去修復で修復される。我々は、miRNA生合成に関わるRNA結合蛋白DGCR8のSerine153 (S153)のリン酸化が転写と共役したヌクレオチド除去修復を制御すること、DGCR8のパートナーであるDroshaも細胞のUV抵抗性に関わることを発見し、新規DNA修復制御経路DGCR8-mediated UV response pathwayを提唱した。このpathwayの生体内での役割の解明、制御メカニズムの解明が残された重要な課題であった。そこで現在までにこのpathwayの機能に必須なS153のリン酸化が起きないようにS153をalanineに置換したDgcr8 S153A変異マウスをCRISPR-CAS9 systemを用いて作成した。また、紫外線起因皮膚がんの発症抑制にこのpathwayが関与すると仮説し、Dgcr8 S153A/S153A, S153A/wt, wt/wtのgenotypeのマウスに紫外線(UV-B)を照射し腫瘍の発生を観察する実験を開始した。さらにこれらのgenotypeのマウス胎児線維芽細胞を作成し、その解析も始めている。またDroshaの紫外線抵抗性への関与の機序を解明するために、CRISPR-CAS9システムを用いてknockout細胞を作成した。これらの成果は、Dgcr8, Droshaの紫外線応答における役割を解明するための重要なツールを作成できたことを意味し、本年度以降に行うDGCR8-mediated UV response pathwayの生体内での役割の解明、制御メカニズムの解明に向けての重要なステップと位置づけられる。

这项研究旨在创建一个连接两个领域的新研究领域，即microRNA实时合成和DNA恢复。紫外线（紫外线）损害DNA并诱导癌症。紫外线引起的DNA损伤是通过核苷酸去除恢复来修复的。我们发现，与miRNA生物合成有关的RNA结合蛋白DGCR8的RNA结合蛋白DGCR8（S153）的磷酸化控制了核苷酸去除的重复，这是一种CO转录，并且与DGCR8的伴侣DROSHA有关他提倡新的DNA修复控制路线DGCR8介导的紫外线响应途径。这是一个重要的问题，它仍然是阐明途径在活体中的作用和阐明控制机制的重要问题。因此，迄今为止，使用CRISPR-CAS9系统创建了一种用丙氨酸代替S153的DGCR8 S153A突变小鼠，因此不会发生S153的磷酸化（对于此途径功能至关重要）。此外，该途径参与抑制紫外线引起的皮肤癌的发育，并且通过在DGCR8 S153A/S153A，S153A/WT，WT/WT/WT基因型小鼠上照射UV-B来照射猫口（UV-B）实验已经开始。此外，已经创建了这些基因型小鼠胎儿成纤维细胞，它们的分析已经开始。为了阐明Drosha参与紫外线耐药性的机制，使用CRISPR-CAS9系统创建了基因敲除细胞。这些成就意味着您创建了一个重要的工具来阐明DGCR8和Drosha的紫外线响应，阐明并控制DGCR8介导的紫外线响应途径的作用，这是今年重要的。阐明机制的一步。