Development of a rapid gamete production technique using germ cell transplantation into a gonad of germ cell-less fish.

使用生殖细胞移植到无生殖细胞鱼的性腺中开发快速配子生产技术。

• 批准号: 21H02289
• 负责人: 吉川 廣幸
• 金额: $ 11.15万
• 依托单位: Fisheries Research and Education Agency
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H02289/
• 关键词: トラフグ; 代理親魚; ゲノム編集; 種苗生産; 生殖細胞欠損

本研究では、ゲノム編集を用いた生殖細胞欠損個体の大量生産技術を開発し、それらを適用した小型近縁種の成魚の生殖腺へと生殖細胞を移植する代理親魚生産技術を確立することにより、世代時間が長い大型海産魚の配偶子を早期に得られる新規の世代時間短縮法の構築を目指している。配偶子を早期に得るための新規世代時間短縮法の確立に向け、本年度は、トラフグ配偶子を生産する代理親であるクサフグを対象として以下の研究を実施した。①生殖細胞欠損魚の大量生産法の開発：生殖細胞の生存に必須なdnd遺伝子内部へ蛍光タンパク質遺伝子タグ(FPタグ)を挿入することにより、遺伝子破壊とその可視化が可能な遺伝子破壊系統の樹立を目指した。これまでに作出しているFPタグがdnd遺伝子へ挿入されたF1世代を交配試験に供し、F2世代を作出した。これらF2には、FPタグが両アレルに挿入されたホモ変異個体が確認され、これらの個体において生殖細胞は生殖腺中に確認されなかった。②生殖腺内移植による代理親魚の作出：前年度までに開発した成魚生殖腺への移植手法を用いて、ドナーとするトラフグの精巣細胞を、宿主とするクサフグ成魚生殖腺へ移植した。移植に使用したトラフグ精巣細胞は細胞表面を蛍光ラベルしたところ、1か月後の生殖腺においてそれらの蛍光が観察された。また、これらの生殖腺からDNAを抽出し、PCR解析を実施したところ、一部の個体でトラフグゲノムが検出された。

在这项研究中，我们旨在通过使用基因组编辑为生殖细胞缺陷的个体开发缩短生成时间的新方法，并建立一种替代生产技术，以将生殖细胞移植到小的，紧密相关的成年鱼类的性腺中，这些技术被应用了，我们旨在为早期购买的新方法提供新的生成时间，以便缩短较大的食物量，以备早期购买食物园的养殖场。为了建立新一代的减少时间来获得配子，今年我们对产生金枪鱼pufferfish配子的代替代父母Slug Pufferfish进行了以下研究。 1。开发用于生殖细胞缺陷鱼类的质量生产方法：通过将荧光蛋白基因标签（FP TAG）插入DND基因中，这对于生殖细胞存活至关重要，我们旨在建立一个基因破坏线，以允许基因破坏和可视化。 F1生成插入了DND基因的先前产生的FP TAG，并经过交配测试，以创建F2生成。在这些F2中，鉴定出插入两个等位基因的FP标签的同型物体，并且在这些个体的性腺中未鉴定出生殖细胞。 2）通过intragona移植产生替代父母鱼类：使用上一年开发的成年性腺的方法，将来自供体pufferfish的睾丸细胞移植到成年性腺，宿主pufferfish。将用于植入的槽腹鱼睾丸细胞在细胞表面上荧光标记，并在一个月后在性腺中观察到它们的荧光。此外，从这些性腺中提取DNA并进行了PCR分析，并在某些个体中检测到鳟鱼pufferfish基因组。

项目成果

代理親魚技術によるトラフグ生産と遺伝資源の保存管理技術の開発

利用替代亲鱼技术和遗传资源保护管理技术发展河豚生产

• 发表时间: 2022
• 作者: 竹内萌;川村祥史;荒井那允;山羽悦郎;藤本貴史;西村俊哉;吉川廣幸
• 通讯作者: 吉川廣幸

Studies on surrogate broodstock technology in tiger puffer and its application for breeding program.

虎河鲀替代亲鱼技术及其在育种工程中的应用研究

• 发表时间: 2022
• 作者: Misato Mori;Tasuku Ito;Ryota Washio;Yasuhiro Shibasaki;Aki Namba;Takeshi Yabu;Dai Iwazaki;Noriko Wada;Hirosi Anzai;Hajime Shiba;Teruyuki Nakanishi;Nobuhiro Mano.;Yoshikawa H
• 通讯作者: Yoshikawa H

遺伝子破壊による生殖細胞欠損クサフグ宿主の作出

通过基因破坏创造生殖细胞缺陷的草河豚宿主

• 发表时间: 2022
• 作者: 吉川廣幸;井野靖子;岸本謙太;木下政人;吉浦康寿
• 通讯作者: 吉浦康寿

密度勾配遠心によるトラフグ精原細胞の濃縮と代理親技術への利用

密度梯度离心富集虎河豚精原细胞并用于代孕技术

• 发表时间: 2021
• 作者: 吉川廣幸;井野靖子;吉浦康寿
• 通讯作者: 吉浦康寿

Enrichment of spermatogonia by density gradient centrifugation for use as a donor of surrogate production of tiger puffer

密度梯度离心富集精原细胞作为虎河豚代孕供体

• DOI: 10.1111/are.15905
• 发表时间: 2022
• 期刊: Aquaculture Research
• 影响因子: 2
• 作者: Yoshikawa Hiroyuki;Ino Yasuko;Shigematsu Atsushi;Yoshiura Yasutoshi
• 通讯作者: Yoshiura Yasutoshi