Unraveling the mechanisms of perineural invasion in pancreatic cancer using in vitro co-culture model

利用体外共培养模型揭示胰腺癌神经周围浸润的机制

• 批准号: 20K22838
• 负责人: 古橋 暁
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Hamamatsu University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-03-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K22838/
• 关键词: 膵癌; 神経周囲浸潤; EphA4; RNA-seq; in vitro 共培養モデル

本講座で確立したIn vitro膵癌ー神経細胞共培養モデルを用いて、神経親和性のあるヒト膵癌細胞株(MIA paca2)と対照の膵癌細胞株（PANC-1)の遺伝子発現の網羅的解析(RNA-sequencing)を施行した。その解析の結果、神経細胞の刺激を受けたMIA paca2で高発現しているAxon guidance pathwayの分子の一つであるEphrin receptor A4 (EPHA4)に着目した。EPHA4がMIA Paca2にPANC-1に比べて高発現していることをRT-PCR及びWestern blottingでmRNA及び蛋白レベルで確認した。MIA Paca2内のEPHA4をノックダウンするとMIA paca2の持つ神経親和性がキャンセルされることを実証した。以上から、EPHA4が高頻度で起きる膵癌の特性の一つである神経周囲浸潤に関連があるのではないかと考察した。この結果を元に、複数回の全国学会の発表及び論文報告を行った。(Furuhashi S., et al.Ephrin Receptor A4 Expression Enhances Migration, Invasion and Neurotropism in Pancreatic Ductal Adenocarcinoma Cells. Anticancer Res, 41(4), 1733-1744. 2021.)

利用本课程建立的体外胰腺癌-神经元共培养模型，对嗜神经性人胰腺癌细胞系（MIA paca2）和对照胰腺癌细胞系（PANC-1）（RNA-进行测序）。作为这一分析的结果，我们重点关注肝配蛋白受体 A4 (EPHA4)，它是轴突引导通路的分子之一，在神经元刺激的 MIA paca2 中高度表达。我们通过 RT-PCR 和 Western blotting 证实，与 PANC-1 相比，EPHA4 在 MIA Paca2 中在 mRNA 和蛋白质水平上高表达。我们证明敲除 MIA Paca2 中的 EPHA4 可以取消 MIA Paca2 的神经趋向性。综上所述，我们认为EPHA4可能与神经周围侵犯有关，而神经周围侵犯是胰腺癌多发的特征之一。基于这些结果，我们在多个国家会议上进行了演示并发表了论文。 （Furuhashi S., et al.Ephrin 受体 A4 表达增强胰腺导管腺癌细胞的迁移、侵袭和向神经性。抗癌研究，41(4), 1733-1744.2021。）