Activation of microglia by lipid metabolites and inhibitory effect by natural nuclear receptor agonists

脂质代谢物对小胶质细胞的激活和天然核受体激动剂的抑制作用

• 批准号: 20K22728
• 负责人: 篠田 知恵
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Aichi Gakuin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-09-11 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K22728/
• 关键词: 脂質代謝の変調; アルツハイマー病; ミクログリア; 核内受容体; 炎症; 脂肪酸; プレクリニカル; 脂質代謝

脂質異常症はアルツハイマー症（AD）発症の危険因子である。「脂質代謝の変調」による「ミクログリアの活性化」がAD発症に先駆するのではないかと考えた。ミクログリア細胞株としてBV2細胞を用い、「脂質代謝の変調」としてパルミチン酸（PA）200 μMを用いたところ炎症性サイトカインのmRNA発現の上昇がみとめられた。RXRアゴニストであるBexarotene（BEX）をPA と同時に添加したところ、PA によるTnfα mRNA 発現の増加が抑制された。この効果を検証する為にRXRアンタゴニストHX531を用いたところ、BEX によるTnfα mRNA 発現抑制効果が消失したことから、PA 誘導による炎症反応や小胞体ストレスは、RXRを介して抑制されると考えられた。本年はそのRXRを介した抗炎症効果を更に詳しく検証する為に、アンタゴニストとしてPA452とUVI3003を用いるだけでなく、RXRα KD細胞の樹立も試みた。10 μM PA452もHX531同様の結果を示したが、アンタゴニスト単独でTnfα mRNA発現を上昇させてしまった。また、10 μM UVI3003は細胞毒性を示したことから濃度の検討を行った結果、5 μMの濃度でTnfα mRNAの抑制が認められ、単独群では対象群と変化は認められなかった。また、RXRαのKD細胞樹立の為５種類のshRNAを購入し導入方法の条件検討を行った。shRNA導入後、細胞を回収しmRNA発現をRT-qPCR法を用いて調べた結果、50%程度のKD効率をもつ細胞を得ることができた。しかし、KD細胞として用いるにはKD効率がまだ低いと言える。今後RXRαのKD細胞樹立の為に更に条件の検討を行うと共に、RXRαのアンタゴニストやKD細胞を用い、RXRを介したミクログリアの活性化抑制の機序を調べていく予定である。

血脂异常是阿尔茨海默病（AD）发展的危险因素。我们推测，“脂质代谢调节”导致的“小胶质细胞激活”可能是 AD 发病的先兆。当使用 BV2 细胞作为小胶质细胞系并使用 200 μM 棕榈酸 (PA) 调节脂质代谢时，观察到炎症细胞因子 mRNA 表达增加。当 RXR 激动剂 Bexarotene (BEX) 与 PA 同时添加时，由 PA 引起的 Tnfα mRNA 表达的增加受到抑制。当我们使用RXR拮抗剂HX531验证这种作用时，BEX对Tnfα mRNA表达的抑制作用消失，表明PA诱导的炎症反应和内质网应激通过RXR被抑制。今年，为了更详细地考察RXR介导的抗炎作用，我们不仅使用PA452和UVI3003作为拮抗剂，还尝试建立RXRα KD细胞。 10 μM PA452 也显示出与 HX531 相似的结果，但单独的拮抗剂增加了 Tnfα mRNA 表达。此外，由于10 μM UVI3003表现出细胞毒性，我们研究了浓度，发现Tnfα mRNA在5 μM浓度下受到抑制，并且与对照组相比，单组中没有观察到变化。此外，为了建立RXRα KD细胞，我们购买了5种shRNA并检查了导入方法的条件。导入shRNA后，收集细胞并使用RT-qPCR检查mRNA表达，结果获得KD效率约为50%的细胞。然而，可以说，用作KD电池时KD效率仍然较低。未来，我们计划进一步研究建立RXRα KD细胞的条件，并利用RXRα拮抗剂和KD细胞研究RXR介导的抑制小胶质细胞活化的机制。