Anesthetic effect and response for the mitochondrial disfunction and mitophagy impairment of burned sarcopenia skeletal muscle

烧伤肌少症骨骼肌线粒体功能障碍和线粒体自噬损伤的麻醉效果和反应

基本信息

批准号：
20K09318
负责人：
植木隆介
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Hyogo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

栄養状態の骨格筋の細胞培養モデルとして、マウス骨格筋芽細胞C2C12細胞を継代培養して、10％FBS(ウシ胎児血清)添加DMEMの培地の交換頻度を2日から、3日、5日、7日、10日間に変化させた状態で、細胞増殖の状態を観察した。その状態で細胞の生死に関して、アポトーシス・ネクローシス・生細胞の判定キットで細胞死とその形態を記録、検討した。さらに、骨格筋への分化誘導を行うために、2％HS（ウマ血清）添加DMEM培地による交換頻度も上記の如く変化させ、細胞の形態及び骨格筋への分化の状態を顕微鏡画像的に撮影、検討した。その結果、細胞の低栄養(培地の交換頻度低下)に伴い、骨格筋の細胞増殖や分化速度の減速・分化不良が形態学的に観察された。これらより細胞実験モデルにおける筋肉細胞の低栄養状態、いわゆるサルコペニアモデルの評価モデルとして使用できることが考えられた。さらに、ミトコンドリア膜電位を定量する色素(JC-1)を用いて、C2C12の筋芽細胞・骨格筋への分化途中の細胞を染色し、定量評価を行った。このような細胞にミトコンドリアの脱共益剤(CCCPなど)を加え、ミトコンドリアに障害を与えることで、その形態学的な変化や膜電位の変化・低下を確認する実験を行った。これにより、低栄養・サルコペニア状態でのさらなる熱傷や敗血症などの追加ストレスが加わったときに、惹起されるMitophagy(ミトコンドリアのAutophagy)障害モデルとなる。この状況で各種の薬剤(Coenzyme Q10など)の治療効果を検討している。これらの過程で生じるミトコンドリア障害から細胞死に至る過程の変化を、アポトーシス・ネクローシス・生存細胞を分別する染色キットを用いて、顕微鏡での蛍光観察法で確認し、データを収集、解析、論文作成中である。その他、アルコールのC2C12細胞の障害モデルを作成し、データを収集した。

作为营养骨骼肌的细胞培养模型，我们传代培养小鼠骨骼肌成肌细胞C2C12细胞，并将添加10%FBS（胎牛血清）的DMEM的频率从2天改为3天、5天、7天和10天。，观察细胞增殖状态。在这种状态下，使用细胞凋亡、坏死和活细胞测定试剂盒记录和检查细胞死亡及其形态。此外，为了诱导分化为骨骼肌，如上所述改变与添加有2％HS(马血清)的DMEM培养基的交换频率，并使用显微镜拍摄细胞的形态和分化为骨骼肌的状态。图像，考虑。结果，形态学上观察到细胞增殖和分化率减慢，并且由于细胞营养不良（培养基更换频率降低）而导致骨骼肌分化不良。从这些结果来看，认为该模型可以用作细胞实验模型中肌肉细胞营养不良状态的评估模型，即所谓的肌少症模型。此外，我们使用定量线粒体膜电位的染料（JC-1）对正在分化为成肌细胞和骨骼肌的C2C12细胞进行染色，并进行定量评估。通过向这些细胞中添加线粒体解偶联剂（例如 CCCP）并破坏线粒体，我们进行了实验来确认形态变化和膜电位的变化/降低。这导致了一种线粒体自噬（线粒体自噬）紊乱模型，当烧伤或脓毒症等额外压力添加到营养不良和肌少症状态时，就会诱发这种紊乱。在这种情况下，我们正在研究各种药物（例如辅酶Q10）的治疗效果。这些过程中发生的过程变化，从线粒体损伤到细胞死亡，通过使用染色试剂盒在显微镜下进行荧光观察来证实，该染色试剂盒可以分离凋亡、坏死和活细胞，并且正在收集、分析数据并发表论文正在写。此外，我们还创建了C2C12细胞的酒精损伤模型并收集了数据。

项目成果

期刊论文数量（3）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Intraoperative Assessment of Surgical Stress Response Using Nociception Monitor under General Anesthesia and Postoperative Complications: A Narrative Review

全身麻醉下使用伤害感受监测仪评估手术应激反应和术后并发症：叙述性回顾

DOI：
10.3390/jcm11206080
发表时间：
2022-10-01
期刊：
Journal of Clinical Medicine
影响因子：
3.9
作者：
Munetaka Hirose;H. Okutani;Kazuma Hashimoto;R. Ueki;N. Shimode;N. Kariya;Yumiko Takao;T. Tatara
通讯作者：
T. Tatara

アルコール性横紋筋融解症に対するマウス骨格筋芽細胞を用いたエタノール添加モデルの検討

使用小鼠骨骼肌细胞对酒精性横纹肌溶解症的乙醇添加模型进行检查

DOI：
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
0
作者：
國見宜史; 植木隆介; 村上裕亮; 廣瀬宗孝
通讯作者：
廣瀬宗孝

Intraoperative Assessment of Surgical Stress Response Using Nociception Monitor under General Anesthesia and Postoperative Complications: A Narrative Review

全身麻醉下使用伤害感受监测仪评估手术应激反应和术后并发症：叙述性回顾

DOI：
10.3390/jcm11206080
发表时间：
2022-10-14
期刊：
影响因子：
3.9
作者：
Munetaka Hirose; Hiroai Okutani; Kazuma Hashimoto; Ryusuke Ueki; Noriko Shimode; Nobutaka Kariya; Yumiko Takao; Tsuneo Tatara
通讯作者：
Tsuneo Tatara

サルコペニア・フレイルと周術期管理

肌少症衰弱和围手术期管理