歯肉上皮細胞の防御システムへのゼノファジーの貢献

异噬对牙龈上皮细胞防御系统的贡献

• 批准号: 20K18522
• 负责人: 伊崎 佳那子
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Fukuoka Dental College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K18522/
• 关键词: 歯肉溝上皮細胞; オートファジー; ゼノファジー; LC3; Beclin-1; LPS; 擦過上皮細胞; 歯周病菌; p62

本年度は、歯肉溝における細菌感染と歯肉溝上皮細胞とのゼノファジーを介した相互作用を検索した。検索方法は、ボランティアから細胞診法を応用して歯肉溝およびコントロール群として遊離歯肉から擦過上皮細胞を採取して材料とした。上皮細胞での細菌感染の程度はパパニコロウ染色およびギムザ染色を行い、擦過上皮細胞内での細菌数から、ボランティアを感染群と非感染群に分けてゼノファジー発現の検索を行なった。また、一部の試料からタンパク抽出を試みた。細菌感染とゼノファジーの関連性については、免疫細胞染色(ICC)およびWestern blotting (WB)法により検討を行った。具体的には、感染群と非感染群で（１）歯周病菌感染に関連した因子の検索。（２）オートファジーおよびゼノファジーの誘導検索として、LC3およびBeclin-1(BECN1)抗体を用いて上皮細胞での発現を確認した。検索結果として、コントロール群からの擦過上皮細胞においては、上皮細胞への細菌感染は歯肉溝上皮と比較してひじょうに少なく、LPS関連因子およびオートファジー関連因子の発現も低かった。一方、歯肉溝上皮においては感染群と非感染群でLPSおよびオートファジー関連因子の発現に明らかな違いが認められた。まず、非感染群に比較して、感染群においてはLPS関連因子の発現亢進が明らかであった。この結果は、感染群での細菌感染程度の強さを表していると考えた。また、オートファジー因子に関しては、LC3-II発現は感染群と非感染群の上皮細胞において発現の相違は明らかではなかった。しかしながら、LC3-IIとギムザによる細菌塊の二重染色においてオートファゴゾームが細菌を取り込んでいる傾向が認められた。すなわち、感染群上皮細胞においてはゼノファージが亢進していると推測された。さらに、BECN1発現は感染群上皮細胞で有意に亢進していた。

今年，我们寻找牙龈沟细菌感染和牙龈沟上皮细胞之间异体吞噬介导的相互作用。搜索方法是利用细胞学方法从志愿者的龈沟和游离牙龈中收集刮取的上皮细胞作为对照组。通过巴氏染色和吉姆萨染色测定上皮细胞中细菌感染的程度，并根据刮取的上皮细胞中细菌的数量，将志愿者分为感染组和非感染组，寻找异噬表达。我们还尝试从一些样品中提取蛋白质。使用免疫细胞化学染色（ICC）和蛋白质印迹（WB）研究细菌感染和异体吞噬之间的关系。具体来说，（1）在感染组和非感染组中寻找与牙周病细菌感染相关的因素。 (2) 作为自噬和异体吞噬的引导搜索，使用 LC3 和 Beclin-1 (BECN1) 抗体确认了上皮细胞中的表达。结果，在对照组刮取的上皮细胞中，与龈沟上皮相比，上皮细胞的细菌感染率非常低，LPS相关因子和自噬相关因子的表达也较低。另一方面，在龈沟上皮中，感染组和非感染组之间LPS和自噬相关因子的表达存在明显差异。首先，与未感染组相比，感染组中LPS相关因子的表达明显增加。该结果被认为代表了感染组中细菌感染的强度。关于自噬因子，感染和未感染上皮细胞之间LC3-II的表达没有明显差异。然而，用 LC3-II 和吉姆萨对细菌团进行双重染色显示自噬体有吞噬细菌的趋势。换句话说，推测感染组的上皮细胞中异噬细胞得到促进。此外，感染组上皮细胞中BECN1表达显着升高。