角膜特異的な新規血管新生制御因子の作用機序および病態における役割の探索

探索角膜特异性新型血管生成调节剂的作用机制及其在病理学中的作用

基本信息

批准号：
20K18338
负责人：
豊野哲也
金额：
$ 2.58万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K18338/
关键词：
角膜血管新生 FFPE 角膜混濁血管新生涙液 angptl7

项目摘要

角膜は恒常性の保たれた状態では無血管組織であり、種々の炎症が生じることで血管新生が起こりその透明性が失われる。角膜に特異的に高発現するAngptl7に着目した。本研究の目的は、角膜特異的な血管新生制御因子の一つと考えられるAngptl7の抗血管新生作用機序を解明すること。また、臨床的に角膜血管新生を伴う角膜混濁性疾患における組織内および涙液中のAngptl7の発現変化を解析することである。マウス角膜血管新生モデルにおいて、Angptl7の発現変化をmRNAレベル、タンパクレベルで確認した。マウスモデルにおいて炎症性血管新生を生じる急性期に発現が高くなり、その後徐々に定常状態に近づいていくことが明らかとなった。正常なマウス角膜ではAngptl7が豊富に発現しており、遺伝子発現をノックダウンすることで新生血管が誘導されることを先行研究［Toyono T, PLos One,2015］で報告しているが、角膜血管新生病態モデルでは急性期に発現上昇がみられ、その病態を抑制するべく発現が亢進することが示唆された。臨床検体を用いた研究として、炎症性角膜血管新生による角膜混濁に対して角膜移植が施行され、保存されている摘出角膜の検体(FFPE)を用い、角膜組織内に発現しているAngptl7タンパクを免疫染色する予定であり、研究申請中である。また、非血管新生角膜のコントロール群より涙液サンプルを採取し、涙液中のAngptl7タンパク発現量をELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)法を用いて定量した。個人差が大きく、涙液中に含まれるタンパク量のばらつきが非常に大きいことが明らかとなった。今後、角膜血管新生疾患による角膜混濁を有する患者より検体採取し、比較する予定である。

角膜是处于稳态的无血管组织，各种类型的炎症会导致血管生成和透明度丧失。我们关注的是 Angptl7，它在角膜中特异性高度表达。本研究的目的是阐明Angptl7的抗血管生成作用机制，Angptl7被认为是角膜特异性血管生成调节剂之一。另一个目的是分析临床上与角膜血管生成相关的角膜混浊疾病中组织和泪液中 Angptl7 表达的变化。在小鼠角膜血管生成模型中，Angptl7 表达的变化在 mRNA 和蛋白质水平得到证实。在小鼠模型中，发现在炎症血管生成发生的急性期表达增加，然后逐渐接近稳定状态。之前的一项研究 [Toyono T, PLos One, 2015] 报道，Angptl7 在正常小鼠角膜中大量表达，并且敲低基因表达会诱导新血管的形成，在新的疾病模型中，在急性期观察到表达增加。该表达得到增强以抑制疾病状态。作为一项使用临床标本的研究，我们使用因炎症性角膜新生血管形成而进行角膜混浊的角膜切除保存标本（FFPE）来研究角膜组织中表达的Angptl7蛋白。我们计划进行免疫染色，目前正在申请研究。。另外，采集无血管化角膜对照组的泪液样本，采用ELISA（酶联免疫吸附测定）方法对泪液中Angptl7蛋白的表达水平进行定量。很明显，存在很大的个体差异，并且泪液中所含蛋白质的量差异很大。未来，我们计划收集因角膜新生血管疾病导致角膜混浊的患者样本并进行比较。