重症下肢虚血に対するNotch遺伝子改変ヒト間葉系幹細胞移植による血管再生療法

Notch基因修饰的人间充质干细胞移植治疗严重下肢缺血的血管再生治疗

基本信息

批准号：
20K17713
负责人：
前田修作
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2021-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K17713/
关键词：
重症下肢虚血 arteriogenesis Notchシグナル再生医療細胞治療

项目摘要

Arteriogenesisは径が太い側副血管の誘導を指し、重症下肢虚血に対する有効な治療効果が期待される。本研究では下肢虚血ラットモデルに対するNotchシグナル遺伝子改変間葉系幹細胞移植において、虚血肢にArteriogenesisを誘導し組織血流を改善させることを仮説とした。Sprague-Dawleyラットの左後肢大腿動脈を結紮し下肢虚血モデルを作成した。虚血誘導後1週目に1×105個のNotchシグナル遺伝子改変間葉系幹細胞(SB群、n=13)およびPBS(コントロール群、n=12)を筋肉内に投与し、その後4週間目までにレーザードプラー血流計を用いて虚血下肢の血流量(虚血肢/健側肢×100%)の評価を行った。その結果、SB群の虚血肢の組織血流の有意な改善を認めた(血流量，SB群：69±13% vs．コントロール群：56±13%，p=0.03)。さらに、治療4週間後の組織学的検討ではαSMA/vWFの陽性かつ径が15μｍ以上の血管数(arterioles，12±3/mm2 vs.5±1/mm2，p<0.01)は有意な増加を認めた。さらにin vitroで血管内皮細胞をNotchシグナル遺伝子改変間葉系幹細胞と共培養し、その遺伝子発現をRNAシークエンスにより解析した。その結果、血管内皮細胞においてNotchシグナル経路に加えて、fluid shear stressに関する経路などArteriogenesisを誘導する可能性のある複数の経路の発現増加を認めた。下肢虚血ラットモデルに対するNotchシグナル遺伝子改変間葉系幹細の投与はArteriogenesisを誘導し、虚血肢の血流を改善させることが示唆された。

动脉生成是指大直径侧支血管的诱导，预计对严重的下肢缺血具有有效的治疗作用。在这项研究中，我们假设在下肢大鼠大鼠模型中，缺血性四肢的缺血性四肢中的动脉生成在缺血性肢体中诱导了动脉生成，假设假设被假设，以改善组织血流。 Sprague-Dawley大鼠的左后肢股动脉连接以创建下肢缺血模型。在诱导缺血的第一周，在肌内肌肉内施用了1 x 105个齿轮信号遗传修饰的间质干细胞（SB组，n = 13）和PBS（对照组，n = 12），到第四周，使用缺血性limb/健康的limb x 100％的血液中的血液中的血液流量，使用了lasel florl flool flool d laster flool laser d laserd laster laster laster lase d lase d lase d laste dep。结果，SB组缺血性四肢的组织血流显着改善（血流量，SB组：69±13％vs.对照组：56±13％，p = 0.03）。此外，治疗4周后的组织学检查表明，阳性αSMA/VWF的血管数量显着增加，直径为15μm或更多（小动脉，12±3/mm2 vs.5±1/mm2，p <0.01）。此外，将血管内皮细胞与Notch信号基因改性的间充质干细胞共培养，并通过RNA测序分析其基因表达。结果，在血管内皮细胞中，除了缺口信号途径外，还观察到可以诱导动脉生成的多种途径，例如与液体剪切应力有关的途径，以增加表达。有人提出，在下肢缺血大鼠模型中，Notch信号遗传改性的间充质茎可诱导动脉生成并改善缺血性肢体中的血液流动。