核内低分子RNA snRNAU2関連断片の機能解明と肺癌予後マーカーとしての評価

小核RNA snRNAU2相关片段的功能阐明和作为肺癌预后标志物的评估

• 批准号: 20K07791
• 负责人: 相磯 聡子
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Kyorin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K07791/
• 关键词: miR-1246; RNU2-1; コピー数多型; バイオマーカー; 偽遺伝子; 肺腺癌; snRNA; qPCR; miRNA; microRNA; スプライソソーム

snRNA U2遺伝子（RNU2-1）のコピー数多型解析法の改良：当遺伝子のコピー数多型は数～数十以上と非常に幅があるため、リアルタイムPCR法による比較定量キットでは正確な結果を得ることは困難で、絶対定量を行う必要があった。令和3年度はこの条件設定を行い健常人検体のコピー数解析を行ったが、この方法は煩雑で、誤差が生じやすかった。そのため令和4年度はデジタルPCR法を用いる方向で改めて条件検討を行い、健常者DNAについてデータを得た。リアルタイムPCR法を用いた場合とほぼ同じ結果であったが、得られたデータの信頼性は高くデータ取得に要する時間は大幅に短縮することができた。肺癌患者検体の収集は本学医学部付属病院において行うことを計画していたが、バイオバンクより提供を受けるため新たに倫理審査申請を行った。snRNA断片の定量における交叉反応の可能性の解析：データベース情報によれば、miR-1246（snRNA U2断片）の塩基配列は少なくとも6種のsnRNA U2偽遺伝子に保存されている。本研究で注目しているpseudo U2断片（偽遺伝子RNU2-2Pに由来）の塩基配列については他には相同配列が見られないことが分かった。これは疾患マーカーとして有利な点である。miR-1246 isoformに関する解析：既存の肺癌患者血清を用いた解析により、肺腺癌患者の血中miR-1246レベルの上昇は、miRBase型ではなく5’末端が2塩基短いisoformの上昇によるものであることを明らかにし報告した（Aiso T & Ueda M. Mol Med Rep 27:12979, 2023）。この成果はmiR-1246の標的遺伝子を理解する上で重要な情報を与える。

snRNA U2基因（RNU2-1）拷贝数变异分析方法的改进：该基因的拷贝数变异差异很大，从几个到几十个甚至更多，因此使用实时PCR方法的比较定量试剂盒可以提供准确的结果很难获得并且需要绝对量化。 2021财年，使用这些条件对健康人体样本进行了拷贝数分析，但这种方法复杂且容易出错。因此，在2020财年，我们重新考虑了使用数字PCR的条件，并获取了健康受试者的DNA数据。结果与使用实时PCR时几乎相同，但获得的数据可靠性高，并且数据采集所需的时间显着缩短。原计划是在该大学医学院附属医院采集肺癌患者的样本，但为了从生物样本库接收样本，需要提交新的伦理审查申请。 snRNA片段定量可能存在的交叉反应性分析：根据数据库信息，miR-1246（snRNA U2片段）的碱基序列在至少六种snRNA U2假基因中是保守的。结果发现，本研究重点的假U2片段（源自假基因RNU2-2P）的核苷酸序列没有其他同源序列。这是作为疾病标志物的优势。 miR-1246异构体分析：使用现有肺癌患者血清进行分析发现，肺腺癌患者血液中miR-1246水平升高是由于5'端短2个碱基的异构体增加，而不是miRBase类型我们澄清并报告了一些内容（Aiso T & Ueda M. Mol Med Rep 27:12979, 2023）。该结果为理解miR-1246的靶基因提供了重要信息。

项目成果

リアルタイムPCR法を用いた高コピー数多型の解析

使用实时 PCR 方法分析高拷贝数变异

• 发表时间: 2021
• 作者: 相磯聡子; 上田真樹子
• 通讯作者: 上田真樹子

5' isomiR is the most abundant sequence of miR-1246, a candidate biomarker of lung cancer, in serum.

5 isomiR 是血清中 miR-1246（肺癌候选生物标志物）最丰富的序列。

• DOI: 10.3892/mmr.2023.12979
• 发表时间: 2023
• 影响因子: 3.4
• 作者: Aiso; T.; & Ueda; M.
• 通讯作者: M.

リアルタイムPCR法を用いた高コピー数多型の解析

使用实时 PCR 方法分析高拷贝数变异

• 发表时间: 2021
• 作者: 相磯聡子; 上田真樹子
• 通讯作者: 上田真樹子

5' isomiR is the most abundant sequence of miR-1246, a candidate biomarker of lung cancer, in serum.

5 isomiR 是血清中 miR-1246（肺癌候选生物标志物）最丰富的序列。

• DOI: 10.3892/mmr.2023.12979
• 发表时间: 2023
• 影响因子: 3.4
• 作者: Aiso; T.; & Ueda; M.
• 通讯作者: M.