肝細胞不均一性に着目した慢性肝疾患の病態進行と発がん機構の解明

以肝细胞异质性为重点阐明慢性肝病的病理进展和致癌机制

• 批准号: 20K17038
• 负责人: 山添 太士
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: National Center for Global Health and Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K17038/
• 关键词: 細胞核画像解析; 慢性肝疾患; 空間的遺伝子解析; シングルセル 調製法; ヘテロ不均一; 発がん; 細胞核画像解析; 慢性肝疾患; 空間的遺伝子解析; シングルセル 調製法; ヘテロ不均一; 発がん

本研究では、肝細胞のヘテロ不均一性(heterogeneity)に着目した新規解析法を用いて、肝細胞癌患者の切除肝標本の非癌部ならびに癌部を解析し、染色体量(ploidy)の変化と慢性肝障害の進行や発癌との関連を解明することで、その病態進行の機序を明らかにすることを目的とする。具体的には、肝細胞癌患者由来の肝癌切除標本の癌部/非癌部と転移性肝癌切除標本の非癌部の病理所見(壊死、免疫細胞浸潤など)におけるheterogeneityをzonationとploidyの両面で解析する。 これまで、転移性肝癌切除標本の非癌部を慢性肝障害のないコントロール群としてploidyとzonationの関連性の評価のために、非アルコール性脂肪性肝疾患の非癌部を5例、直腸癌の転移性肝がんの非癌部を5例解析した。2年目はさらに空間的遺伝子解析としてVISIUMを利用し、新たに4例の非アルコール性脂肪性肝疾患 の非癌部の新鮮凍結切片を用いて行った。ヒト由来手術標本の新鮮凍結切片を用いたが、遺伝子品質にばらつきが大きいことがわかった。このため遺伝子品質の良いものから順に解析した。通常のt-SNE解析に加えて、組織切片上で門脈域の線維化をランドマークとして遺伝子解析スポットの各距離を変数としてclusteringを行なったが特徴的な遺伝子群は見出せなかった。3年目は、パラフィン標本を用いたVISIUMも上市されたため、これらを用いた解析を10例行なった。現在解析中であるが、凍結切片を用いたVISIUMにくらべてサンプル品質に堅牢なシステムである可能性があった。また、シングルセル解析を慢性肝疾患モデルマウスの肝組織を用いてサンプル調製法をいくつか試行し、今後、慢性障害肝細胞およびヒト由来細胞で細胞調製法を確立し、シングルセル解析も行う予定である。

这项研究旨在通过分析针对肝癌性的新分析方法来分析肝细胞癌患者切除的肝脏标本的非癌性和癌性区域的病理进展的机制。具体而言，在病理发现（坏死，免疫细胞入侵等）中的异质性是肝细胞骨癌患者和非癌性部分的非癌性部分的肝癌/非癌性部位的异质性。迄今为止，为了评估倍性和分区之间的关系，将转移性肝癌切除标本的非癌性部分分析为没有慢性肝损害的对照组，五例非癌性脂肪肝病的非癌性部分和5例转移性肝癌转移性肝癌转移性肝癌。在第二年，将森林用作空间遗传分析，并进行了四个新的非酒精性脂肪肝病新病例的非癌性区域的新鲜冷冻切片。使用了新鲜的人类衍生外科手术标本的冷冻切片，发现遗传质量的变化很大。因此，分析是按基因质量顺序进行的。除了常规的T-SNE分析外，还对门标的纤维化作为地标进行了聚类，并将遗传分析点的每个距离用作变量，但没有发现独特的基因组。在第三年，还启动了使用石蜡标本的森林，因此使用这些样品分析了10例。尽管目前正在分析中，但与使用冷冻部分相比，该系统可能在样品质量方面具有鲁棒性。此外，我们将尝试使用慢性肝病模型小鼠的肝组织制备许多样品，将来我们将建立一种细胞制备方法，该方法具有长期受损的肝细胞和人类衍生的细胞，并进行单细胞分析。