新規S1P輸送体MFSD2Bの創傷治癒における役割と活性制御機構の解明

阐明新型S1P转运蛋白MFSD2B在伤口愈合中的作用和活性调节机制

基本信息

批准号：
20K07059
负责人：
小林直木
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Setsunan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

赤血球と血小板はどちらもS1P輸送体のMFSD2Bを発現しており、MFSD2Bを介して細胞内のS1Pを細胞外へ放出する。しかしながら、赤血球からのS1P放出が恒常的であるのに対し、血小板からのS1P放出は細胞の活性化に依存する点で大きく異なっている。赤血球由来のS1Pが血漿に含まれるS1Pの主な供給源になっているのに対し、活性化した血小板から放出されるS1Pは、創傷部位において血管新生・細胞増殖・細胞遊走などを促進すると考えられている。私は赤血球・血小板におけるMFSD2Bの活性制御機構を明らかにするため、MFSD2Bのリン酸化に着目し、生化学的解析を行っている。これまでに、C末端に3xFLAGタグを融合したMFSD2B（MFSD2B-C3FLAG）の最適な精製条件を検討し、MFSD2B-C3FLAGが培養細胞内でリン酸化されることを明らかにした。さらに、MFSD2Bのアミノ酸残基のうち、リン酸化される可能性のある33個のセリン・スレオニン残基をすべてアラニン残基へ置換した場合、MFSD2Bは全くリン酸化されず、S1P輸送活性も完全に消失することを見出している。2022年度は、MFSD2Bを3つの領域（Ser26-Thr181, Thr215-Ser348, Thr367-Ser502）に分割し、それぞれの領域に存在する推定リン酸化残基をAla置換したMFSD2Bの変異体をすべての組み合わせで構築した。その結果、MFSD2BのSer26-Thr181またはThr367-Ser502に存在する推定リン酸化残基をAla置換した場合に、MFSD2Bのリン酸化およびS1P輸送活性はいずれも大きく減少したことから、これらの領域のセリン・スレオニン残基のリン酸化がS1P輸送活性に重要である可能性が示唆された。

红细胞和血小板都表达 S1P 转运蛋白 MFSD2B，它将细胞内的 S1P 释放到细胞外。然而，主要区别在于红细胞中的 S1P 释放是恒定的，而血小板中的 S1P 释放取决于细胞激活。虽然来自红细胞的S1P是血浆中所含S1P的主要来源，但从活化的血小板释放的S1P被认为可以促进伤口部位的血管生成、细胞增殖和细胞迁移。我正在进行针对MFSD2B磷酸化的生化分析，以阐明红细胞和血小板中MFSD2B活性的调节机制。到目前为止，我们已经研究了 C 末端融合有 3xFLAG 标签的 MFSD2B (MFSD2B-C3FLAG) 的最佳纯化条件，并揭示了 MFSD2B-C3FLAG 在培养细胞中被磷酸化。此外，在MFSD2B的氨基酸残基中，当所有33个可被磷酸化的丝氨酸和苏氨酸残基被替换为丙氨酸残基时，MFSD2B根本不被磷酸化，并且S1P转运活性被完全消除。 2022年，我们将MFSD2B分为三个区域（Ser26-Thr181、Thr215-Ser348、Thr367-Ser502），并开发MFSD2B突变体的所有组合，其中每个区域中假定的磷酸化残基被Ala取代。结果，当MFSD2B的Ser26-Thr181或Thr367-Ser502中存在的推定磷酸化残基被Ala取代时，MFSD2B的磷酸化和S1P转运活性均显着降低，表明丝氨酸和苏氨酸残基的磷酸化可能对于 S1P 传输活动很重要。

项目成果

期刊论文数量（6）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

シメチジン類縁体を用いたヒトMATE1輸送体阻害作用の構造活性相関研究

使用西咪替丁类似物抑制人 MATE1 转运蛋白的构效关系研究

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
新屋進; 河合健太郎; 小林直木; 軽尾友紀子; 樽井敦; 佐藤和之; 大塚正人; 表雅章
通讯作者：
表雅章

トランスポーターが制御する体内の脂質輸送

体内脂质运输由转运蛋白控制

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
小林直木
通讯作者：
小林直木

赤血球・血小板S1P輸送体MFSD2Bの活性制御機構の解析

红细胞/血小板S1P转运蛋白MFSD2B活性调控机制分析

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
小林直木; 中村透唯; 大塚正人; 西毅
通讯作者：
西毅

S1P輸送体MFSD2Bの活性制御機構の解析

S1P转运蛋白MFSD2B活性控制机制分析

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
小林直木; 金澤豊; 中村透唯; 大塚正人; 西毅
通讯作者：
西毅

Fluorophenylalkyl-substituted cyanoguanidine derivatives as bacteria-selective MATE transporter inhibitors for the treatment of antibiotic-resistant infections

氟苯烷基取代的氰基胍衍生物作为细菌选择性 MATE 转运蛋白抑制剂用于治疗抗生素耐药性感染

DOI：
10.1016/j.bmc.2022.117042
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
3.5
作者：
Susumu Shinya; Kentaro Kawai; Naoki Kobayashi; Yukiko Karuo; Atsushi Tarui; Kazuyuki Sato; Masato Otsuka; Masaaki Omote
通讯作者：
Masaaki Omote