Investigation of the molecular mechanism related to vascular aging by the analysis of congenital vascular aging.

通过先天性血管老化分析，探讨血管老化相关的分子机制。

基本信息

批准号：
21K11728
负责人：
松尾和彦
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K11728/
关键词：
一次線毛中心体血管内皮血管老化細胞分裂 ES細胞

项目摘要

本研究課題は、「１．血管内皮細胞においてPCNTと相互作用する分子の探索」、「２．PCNTが血管内皮細胞で担うシグナルの解析」、「３．Pcntコンディショナル KOマウスの作製」の３つの研究計画で構成されている。「血管内皮細胞におけるPCNTと相互作用する分子の探索」に関しては、昨年度おこなった解析によりPCNTと相互作用する候補タンパク質をいくつか同定している。本年度は、同定した候補タンパク質が実際にPCNTと相互作用を示すかについて検討をおこなった。まず、培養細胞において強制発現系を用いてPCNTと同定したタンパク質が相互作用するかについて検討を行うため、これらの候補タンパク質のクローニングをおこなった。同定された候補タンパク質の分子量が非常に大きい分子が多く、クローニングが困難であった。これら候補タンパク質のうち、PCNTと相互作用を示す分子をいくつか見いだすことができた。さらに、免疫蛍光染色により、一次線毛特異的に局在する分子も見いだすことができた。「PCNTが血管内皮細胞で担うシグナルの解析」に関しては、上記の解析により同定されてきた分子の中に、血管内皮において細胞の増殖に関与する事が報告されているシグナル分子が含まれており、現在、この分子とPCNTとの相互作用や細胞内局在などについて検討をおこなっている。「PcntコンディショナルKOマウスの作製」に関しては、一度、ES細胞は樹立することができ、マウスの作成を試みた。しかしながら、用いたES細胞の状態が良くないためか、キメラマウス作成時のキメラ率が悪く、キメラマウスと野生型マウスの交配をおこなったがノックアウトマウスは生まれてこなかった。このため、再度、ES細胞の樹立をおこなっている。

研究主题是：1.寻找与血管内皮细胞中的PCNT相互作用的分子，2.分析血管内皮细胞中PCNT发挥的信号，以及3.Pcnt条件KO小鼠的生成它由两个研究计划组成。关于“寻找与血管内皮细胞中的 PCNT 相互作用的分子”，我们通过去年进行的分析确定了几种与 PCNT 相互作用的候选蛋白质。今年，我们研究了确定的候选蛋白是否确实与 PCNT 相互作用。首先，为了检查所鉴定的蛋白质是否使用培养细胞中的强制表达系统与PCNT相互作用，克隆了这些候选蛋白质。许多已鉴定的候选蛋白质具有极大的分子量，使得克隆变得困难。在这些候选蛋白中，我们能够找到一些与 PCNT 相互作用的分子。此外，通过免疫荧光染色，我们能够找到特异性定位于初级纤毛的分子。关于“血管内皮细胞中PCNT发挥的信号的分析”，通过上述分析鉴定出的分子包括据报道参与血管内皮细胞增殖的信号分子，我们目前正在研究该分子与PCNT之间的相互作用。它的细胞内定位。关于“Pcnt条件KO小鼠的产生”，我们能够建立ES细胞并尝试创建小鼠。然而，或许是因为所使用的ES细胞条件较差，导致制作嵌合小鼠时的嵌合率较差，虽然将嵌合小鼠与野生型小鼠杂交，但没有诞生出基因敲除小鼠。为此，我们正在尝试再次建立ES细胞。