肝星細胞におけるレチノイン酸受容体の役割の解明と肝線維化治療への応用

阐明视黄酸受体在肝星状细胞中的作用及其在肝纤维化治疗中的应用

基本信息

批准号：
21K11657
负责人：
目崎喜弘
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Jikei University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

蛍光ビーズを注入したラット肝臓標本の免疫組織化学染色を行い、蛍光ビーズのシグナルと重ね合わせて評価した。用いた抗体は、抗アルブミン抗体、抗stabilin-2抗体、抗F4/80抗体、抗CD68抗体、抗レシチン：レチノールアシルトランスフェラーゼ（LRAT）抗体、抗Desmin抗体、抗細胞内レチノール結合タンパク質I（CRBP I）抗体である。抗アルブミン抗体は肝実質細胞、抗stabilin-2抗体は肝類洞内皮細胞、抗F4/80抗体と抗CD68抗体はクッパー細胞、抗LRAT抗体、抗Desmin抗体と抗CRBP I抗体は肝星細胞のマーカーである。蛍光ビーズは直径20 nmのものと500 nmのものを用いた。その結果、直径20 nmの蛍光ビーズは、類洞内腔のクッパー細胞に取り込まれるとともに、類洞周囲腔に存在する肝星細胞にも取り込まれることが明らかとなった。一方、直径500 nmの蛍光ビーズは、類洞内腔にとどまり、クッパー細胞にのみ取り込まれた。興味深いことに、肝星細胞やクッパー細胞とともに、肝小葉内で盛んな貪食能を持つ細胞として知られている肝類洞内皮細胞は、径の大きい蛍光ビーズも径の小さい蛍光ビーズも全く取り込まなかった。肝類洞内皮細胞の異物貪食は、受容体介在型のエンドサイトーシスによって行われていることが知られており、今回用いた蛍光ビーズを取り込まない原因と考えられた。肝類洞内皮細胞のfenestrationを通過する大きさの蛍光ビーズと通過しない大きさの蛍光ビーズを用いることにより、肝星細胞とクッパー細胞を異なる蛍光で標識することが可能となった。

对注射荧光珠的大鼠肝脏标本进行免疫组织化学染色，并通过叠加来自荧光珠的信号进行评估。使用的抗体是抗白蛋白抗体、抗稳定蛋白2抗体、抗F4/80抗体、抗CD68抗体、抗卵磷脂：视黄醇酰基转移酶(LRAT)抗体、抗结蛋白抗体和抗细胞内视黄醇抗体。结合蛋白 I (CRBP I) 抗体）是一种抗体。抗白蛋白抗体靶向肝实质细胞，抗稳定蛋白2抗体靶向肝窦内皮细胞，抗F4/80和抗CD68抗体靶向Kupffer细胞，抗LRAT、抗Desmin和抗CRBP I抗体靶向肝星状细胞是一个标记。使用直径为20 nm和500 nm的荧光珠。结果显示，直径为 20 nm 的荧光珠被肝窦腔内的库普弗细胞以及肝窦周围空间中的肝星状细胞吸收。另一方面，直径为 500 nm 的荧光珠保留在窦腔中，仅被库普弗细胞吸收。有趣的是，肝窦内皮细胞与肝星状细胞和库普弗细胞一样，是肝小叶内活跃的吞噬细胞，不吸收任何大小的荧光珠。已知肝窦内皮细胞通过受体介导的内吞作用来吞噬异物，这被认为是本研究中使用的荧光珠不被摄取的原因。通过使用足够大的荧光珠以通过肝窦内皮细胞的开窗和足够大的荧光珠以不通过，可以用不同的荧光标记肝星状细胞和库普弗细胞。