Development of novel cancer therapy targeting the interaction of the HSP40 family with mutant p53

针对 HSP40 家族与突变 p53 相互作用的新型癌症疗法的开发

基本信息

批准号：
21K09855
负责人：
戒田篤志
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09855/
关键词：
頭頸部がん p53 HSP40ファミリー p53変異 Gain of function HSP40 ケミカルスクリーニング

项目摘要

p53の安定化に寄与し得るHSP40ファミリーメンバーを同定すべく、2021年度より変異p53の蛍光標識ベクターの作製を試みてきた。p53R175H変異に対して蛍光タンパク質であるAcGFPをN末端側またはC末端側に融合したベクターをそれぞれ作製し、その機能性について検討したところ、C末端側に融合した際に内因性変異p53に類似した挙動を示すことが明らかになったため、p53R175H-AcGFPベクターを使用してHSP40ファミリーメンバー同定のためのスクリーニングを行った。具体的には各HSP40に対するsiRNAをデザインし、上記ベクターを頭頸部扁平上皮癌細胞株であるHN31細胞のp53ノックアウト株に導入した細胞に対して各siRNAを作用させた際にGFP発現がどのように変化するかを自動顕微鏡観察システム下にて検討を行った。その結果、一部のHSP40ファミリーメンバーにおいて20％前後の発現低下が認められたものの、その変化はわずかであった。上記ベクターでは、p53安定化に対してcriticalな作用を示し得るHSP40を同定できなかったため、変異p53(C176F)を発現しているHN31細胞を用い、各siRNAを作用させ、p53に対する蛍光免疫染色後にその蛍光発現から内因性の変異p53発現の変化について解析した。その結果、少なくとも6種類のHSP40に対するsiRNAで処理した際ににおいて30～60％程度の発現低下が認められた。現在、p53安定化因子候補として同定されたHSP40についてvalidationを行っているところである。

为了识别有助于 p53 稳定的 HSP40 家族成员，我们自 2021 年以来一直在尝试创建荧光标记的突变 p53 载体。我们创建了将 AcGFP（一种荧光蛋白）融合到 p53R175H 突变的 N 末端或 C 末端的载体，并检查了它们的功能。当我们清楚观察到这种行为时，我们进行了筛选以鉴定 HSP40 家族。成员使用 p53R175H-AcGFP 载体。具体来说，我们为每个HSP40设计了siRNA，并将上述载体导入头颈鳞状细胞癌细胞系HN31细胞的p53敲除株中，我们在自动显微镜观察系统下检查了这种变化是否发生。结果，虽然观察到一些HSP40家族成员的表达减少了20%左右，但变化很小。使用上述载体，无法鉴定对p53稳定具有关键作用的HSP40，因此，将每种siRNA应用于表达突变体p53（C176F）的HN31细胞，并且在对p53进行荧光免疫染色后，发现内源突变体p53的变化。从荧光表达中分析表达。结果，当用针对至少六种类型的 HSP40 的 siRNA 处理时，观察到表达下降了 30-60%。我们目前正在验证 HSP40，它已被确定为 p53 稳定因子的候选者。

项目成果

期刊论文数量（7）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Children's Mercy Research Institute(米国)

儿童慈善研究所（美国）

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Children's Mercy Research Institute(米国)

儿童慈善研究所（美国）

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

HSP40/DNAJA1による構造変異型p53依存的な癌転移促進機構の解明

阐明 HSP40/DNAJA1 依赖结构突变 p53 促进癌症转移的机制

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
戒田篤志;岩熊智雄
通讯作者：
岩熊智雄

HSP40ファミリーDNAJA1と変異p53間のinteractionを介した癌転移促進機構

HSP40家族DNAJA1与突变p53相互作用介导的癌症转移促进机制

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
戒田　篤志;三浦　雅彦
通讯作者：
三浦　雅彦

DNAJA1 promotes cancer metastasis through interaction with mutant p53

DNAJA1通过与突变p53相互作用促进癌症转移

DOI：
10.1038/s41388-021-01921-3
发表时间：
2021-06-28
期刊：
Oncogene
影响因子：
8
作者：
A. Kaida;Satomi Yamamoto;A. Parrales;E. Young;A. Ranjan;M. Alalem;Kei;Yu Oikawa;H. Harada;Tohru Ikeda;S. Thomas;Francisco j. Diaz;T. Iwakuma
通讯作者：
T. Iwakuma