腎移植後の交感神経再生性変化と間質線維化に関する網羅解析

肾移植术后交感神经再生变化及间质纤维化的综合分析

基本信息

批准号：
21K09358
负责人：
山本泉
金额：
$ 2.5万
依托单位：
Jikei University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

移植腎の長期生着は平均17年と依然として短く、病理学的に、尿細管萎縮/間質線維化(IF/TA)の進展である。移植腎とNativeの腎炎/腎症の違いは、免疫抑制剤の使用と神経系やリンパ管系の外科的断裂が挙げられる。最近、腎臓の神経系の遮断がIF/TAに抑制的に働くと報告され、「除神経後の神経再生が強いほど間質線維化及び尿細管萎縮が進展しやすい」という仮説の検証が、本研究の目的である。これまでに交感神経マーカ－Tyrosinehydroxylase(Abcam,Bristol,UK)の免疫染色を検証し、腎移植術に伴う徐神経後の退行性変化と、その後の再生性変化を観察した。また、腎線維化関連分子機構をNanostring社の開発したnCounter;にて検証するため、RNeasy FFPE kit、Qiagenを用いて RNAを抽出し目標とする回収量が達成できることを確認した。本年度は、症例の抽出の検討およびnCounter;による測定の外注(アズワン社)およびnCounterで使用するバイオインフォマティクスのプラットフォームであるRosalind;のシュミレーションを行った。nCounterを用いた網羅解析では20症例まで検証可能であることを確認し、実際に解析する症例については、陰性コントロールとして0hr生検5例、長期に安定した5例、カルシニューリン阻害剤によるIF/TA 5例、慢性拒絶反応5例を対象とすることとした。また、 RNAサンプルの条件（A260/A280：1.7-2.3、A260/A230：1.8-2.3 およびBioAnalyzerによるDV300測定、input推奨量250ng以上）を確認した。また、Rosalind;の解析手法を習得した。以上より、現在、実際のサンプルを用いてデータを解析を行う準備が整った状況である。

移植肾的长期存活期仍然较短，平均为17年，从病理上看，这是由于肾小管萎缩/间质纤维化（IF/TA）的发展所致。移植性肾炎/肾病与天然肾炎/肾病之间的差异包括免疫抑制剂的使用以及神经和淋巴系统的手术破坏。最近有报道称肾神经系统阻断对IF/TA有抑制作用，并提出“去神经后神经再生越强，间质纤维化和肾小管萎缩越容易进展”的假说这就是本研究的目的。到目前为止，我们已经检查了交感神经标记物酪氨酸羟化酶（Abcam，布里斯托尔，英国）的免疫染色，并观察了与肾移植相关的去神经后的退行性变化以及随后的再生变化。此外，为了使用Nanostring开发的nCounter验证肾纤维化相关的分子机制，我们使用RNeasy FFPE试剂盒和Qiagen提取RNA，并确认可以达到目标回收量。今年，我们研究了病例提取、使用 nCounter（As One Inc.）的外包测量以及模拟 nCounter 中使用的生物信息学平台 Rosalind。我们确认使用nCounter通过综合分析最多可以验证20例，实际分析的病例包括5例0小时活检作为阴性对照、5例病情长期稳定的病例以及使用钙调神经磷酸酶抑制剂的IF/TA。决定针对5名患者和5名患有慢性排斥反应的患者。我们还确认了 RNA 样品条件（A260/A280：1.7-2.3、A260/A230：1.8-2.3 和使用 BioAnalyzer 进行 DV300 测量，建议输入量为 250 ng 或更多）。我还学习了罗莎琳德的分析方法。基于以上内容，我们现在准备使用实际样本来分析数据。