各分化段階の骨芽細胞に対するIV型コラーゲンの作用の違いに関する研究

IV型胶原对各分化阶段成骨细胞影响差异的研究

• 批准号: 21K09260
• 负责人: 添田 聡
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Nippon Veterinary and Life Science University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09260/
• 关键词: VI型コラーゲン; 骨芽細胞; エンドトロフィン; NG2; TEM8; 遺伝子ノックダウン; ラット; ウシ; 骨膜; 一次オステオン; 骨形成

・研究1骨膜の骨芽細胞におけるVI型コラーケン受容体(NG2とTEM8)の発現とVI型コラーケン（Col6）沈着領域の関連性に関する研究：免疫組織化学的検索の結果、生後7-28日齢のラット大腿骨骨幹部では、1次オステオン内vascular cavityにおいて、RUNX2陽性骨芽細胞系細胞の大部分にエンドトロフィン受容体であるTEM8の発現が認められた。以上の結果から、細胞内でCol6が切断され、可溶性因子として細胞から分泌されるETPは、骨膜の骨芽細胞の分化成熟過程に何らかの作用を及ぼしている可能性が示唆された。・研究2 各分化段階の骨芽細胞に対するVI型コラーゲン（Col6）とエンドトロフィン（ETP）の作用に関する研究：ラット初代培養骨芽細胞において、骨基質産生誘導直後にはCol6添加（72時間）によってALP活性の有意な減少が認められたが、誘導後5日目および10日目ではALP活性の変化は認められなかった。ETP添加（72時間）では骨基質産生誘導直後から10日目に、ALP活性の有意な減少が認められた。以上の結果から、Col6およびETPは共に骨基質産生能を持つ骨芽細胞へと分化した初期の段階で、成熟および骨基質産生能を抑制するものと考えられた。さらに、ETPは、骨芽細胞へ分化成熟過程を通して、成熟と骨基質産生能を抑制することが示唆された。・研究3骨芽細胞の分化・成熟におけるVI型コラーケン受容体(NG2とTEM8)の関与に関する研究：shRNAによるNG2遺伝子のノックダウンを行った結果、ラット初代培養骨芽細胞およびマウス骨芽細胞細胞株MC3T3E1において、骨基質産生能誘導前では、細胞増殖の有意な減少が認められた。以上の結果から、骨基質産生能を獲得する前の未成熟な骨芽細胞においては、Col6はNG2を介して細胞増殖を促進しているものと考えられた。

・研究1 骨膜成骨细胞中VI型kolaken受体（NG2和TEM8）的表达与VI型kolaken（Col6）沉积区域之间关系的研究：免疫组织化学搜索的结果，出生后7-28天的年龄在大鼠股骨干中，内养蛋白受体 TEM8 在初级骨血管腔内的大多数 RUNX2 阳性成骨细胞中表达。上述结果提示，Col6在细胞内裂解后作为可溶性因子从细胞分泌的ETP可能对骨膜内成骨细胞的分化成熟过程有一定影响。・研究2 VI型胶原蛋白（Col6）和内养蛋白（ETP）对各分化阶段的成骨细胞的影响的研究：在大鼠原代培养的成骨细胞中，在诱导骨基质产生后（72小时）立即添加Col6，但没有变化诱导后第5天和第10天观察ALP活性。当添加ETP（72小时）时，在诱导骨基质产生后10天观察到ALP活性显着降低。从以上结果可以认为，Col6和ETP均抑制在分化为能够产生骨基质的成骨细胞的早期阶段的成熟和骨基质产生能力。此外，有人认为ETP通过分化和成熟过程抑制成骨细胞的成熟和骨基质产生能力。・研究 3 VI 型 kolaken 受体（NG2 和 TEM8）参与成骨细胞分化和成熟的研究：通过使用 shRNA 敲低 NG2 基因，原代培养的大鼠成骨细胞和小鼠成骨细胞在 MC3T3E1 株中，在诱导骨基质产生能力之前观察到细胞增殖显着下降。从以上结果来看，Col6被认为通过NG2在尚未获得产生骨基质的能力的未成熟成骨细胞中促进细胞增殖。