Identification of circulating tumor cells in the blood of lung cancer patients with an innovative new device

使用创新设备识别肺癌患者血液中的循环肿瘤细胞

基本信息

批准号：
21K08909
负责人：
坂尾幸則
金额：
$ 2.5万
依托单位：
Teikyo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の一つのテーマはCTC自動検出装置の独自開発であり、光学顕微鏡による検出の鍵となるCTCのスライドグラスへの転写装置の開発を行った。初年度開発の樹脂製パッドを先端部に装着した直接加圧式CTC転写装置は性能的に十分ではなく、本年度は新たに空気加圧式転写装置を試作した。その結果、空気加圧式が形態保持能力が優れた装置であることが判明したため、この転写装置と既開発のCTC分離装置を組み合わせることにより光学顕微鏡を用いてCTCを免疫組織学的に検出できる独自のプラットフォームを完成した。次に本装置を用いて肺癌におけるCTCの臨床的意義を検証した。３３例の肺がん患者検体（肺静脈血: PVB、肺動脈血: PABおよび末梢血: PB）を用いてCTCの臨床的意義の検討を行った。その結果、興味あることにPVBとPABはいずれもPBに比べて有意にCTC数が多く、症例数は少ないものの病期と相関する傾向が見られた。またPVB、 PABではクラスターCTCが多いことから遺伝子解析に有用であることが判明した。さらにCTCの遺伝子解析法の検討を行った。サイトケラチン免疫染色によるCTC計数後にスライドグラスからDNA抽出を行うための発色法について検討し、2次抗体の標識としてPOXに比べALPの方が活性酸素によるDNA分解を防ぎ、DNA抽出が高効率なことが判明した。このDNAを用いてDropletデジタルPCR法による遺伝子変異解析法を確立した。数の多い肺静脈血(PVB)を用いてCTCのEGFR変異について解析を行った。肺静脈血PVBからCTCが検出できた8例を対象とし、7例にCTCが同定され、そのうち3例にEGFR変異が検出された。肺切除組織からのEGFR検査と結果が一致したのは6例（変異ありでの一致が2例、変異無しでの一致が4例）、不一致は2例であった。

本研究的主题之一是自动CTC检测装置的原创开发，我们开发了一种将CTC转移到载玻片上的装置，这是使用光学显微镜进行检测的关键。第一年开发的尖端带有树脂垫的直压式 CTC 转移装置性能不够，因此今年我们原型设计了一种新的气压转移装置。结果发现，气压型是具有优异形状保持能力的装置，通过将该转移装置与已经开发的CTC分离装置相结合，我们开发了一种独特的系统，可以使用光学显微镜进行免疫组织学检测CTC . 完成了平台。接下来，我们利用该装置来验证CTC在肺癌中的临床意义。我们使用 33 名肺癌患者的标本（肺静脉血：PVB、肺动脉血：PAB 和外周血：PB）研究了 CTC 的临床意义。有趣的是，PVB和PAB的CTC数量均显着高于PB，尽管病例数量较少，但存在与疾病阶段相关的趋势。此外，PVB 和 PAB 被发现可用于遗传分析，因为它们具有许多聚集的 CTC。此外，我们研究了 CTC 的遗传分析方法。我们研究了一种使用细胞角蛋白免疫染色计数 CTC 后从载玻片中提取 DNA 的着色方法。作为二抗的标记，ALP 比 POX 更有效地防止活性氧引起的 DNA 降解，从而实现高效的 DNA 提取。那。利用该DNA，我们建立了使用液滴数字PCR方法的基因突变分析方法。我们使用大量肺静脉血 (PVB) 样本分析了 CTC 中的 EGFR 突变。肺静脉血PVB检出CTC的8例中，7例检出CTC，其中3例检出EGFR突变。与肺切除组织EGFR检测结果一致的有6例（突变2例，无突变4例），不一致2例。