NCYMによる分裂期制御機構とその神経芽腫発がんへの寄与の解明

阐明 NCYM 的有丝分裂相控制机制及其对神经母细胞瘤癌变的贡献

• 批准号: 21K08610
• 负责人: 末永 雄介
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Chiba Cancer Center (Research Institute)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08610/
• 关键词: 神経芽腫; MYCN; NCYM; ORFドミナンス; Myc-nick; SNP; VUVCD; 分裂期チェックポイント; 分裂期崩壊; Caspase-2

MYCN/NCYMゲノム領域における多くの転写因子結合サイトを同定してきた。CRISPR-dCAS9法により転写因子の結合を阻害したところ、OCT4の結合を阻害することでMYCN/NCYM増幅神経芽腫の細胞死が誘導されることが明らかになった。そこで、今後はOCT4結合を阻害するCRISPR-dCAS9をMYCN/NCYM増幅神経芽腫（CHP134およびIMR32)に導入し、細胞からRNAを抽出してRNA-seqにより発現変動する細胞内経路をGene ontology 解析により同定したところ、RNA proccesing, splicing, 細胞増殖関連遺伝子が有意に蓄積していた。また、ORFドミナンス（Suenaga et al., EMBO Rep. 2022)の高い転写産物がcoding, noncoding RNA共に低下しており、細胞内でMYCN/NCYMがORFドミナンスの高い転写産物の発現を維持することが示された。さらに、これらORFドミナンスの高い転写産物群は神経芽腫の不良な予後と有意に関連した。

我们在 MYCN/NCYM 基因组区域鉴定了许多转录因子结合位点。当使用 CRISPR-dCAS9 方法抑制转录因子的结合时，发现抑制 OCT4 结合会诱导 MYCN/NCYM 扩增的神经母细胞瘤中的细胞死亡。因此，未来我们将抑制OCT4结合的CRISPR-dCAS9引入MYCN/NCYM扩增的神经母细胞瘤（CHP134和IMR32）中，从细胞中提取RNA，并利用RNA对表达变化的细胞内通路进行基因本体分析-seq. 结果，与RNA加工、剪接和细胞增殖相关的基因显着积累。此外，具有高 ORF 优势的转录本 (Suenaga 等人，EMBO Rep. 2022) 的编码和非编码 RNA 均减少，表明 MYCN/NCYM 维持了细胞中具有高 ORF 优势的转录本的表达。此外，这些具有高ORF优势的转录本与神经母细胞瘤的不良预后显着相关。

项目成果

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CRISPR-dCas9-based inhibition of OCT4 binding at the MYCN locus induces neuroblastoma cell death accompanied by the downregulation of RNA translational efficiency.

基于 CRISPR-dCas9 的 OCT4 在 MYCN 位点结合的抑制会诱导神经母细胞瘤细胞死亡，并伴随着 RNA 翻译效率的下调。

• 发表时间: 2022
• 作者: K Nakatani; H Kogashi; T Sakuma; T Yamamoto; Y Hippo; Y Suenaga
• 通讯作者: Y Suenaga

Functional and structural characterization of de novo evolved protein NCYM

从头进化蛋白 NCYM 的功能和结构表征

• 发表时间: 2021
• 作者: K. Nakatani

Inhibition of OCT4 binding at the MYCN locus induces neuroblastoma cell death accompanied by downregulation of transcripts with high-open reading frame dominance

抑制 MYCN 位点上的 OCT4 结合会诱导神经母细胞瘤细胞死亡，并伴有高开放阅读框优势的转录本下调

• DOI: 10.3389/fonc.2024.1237378
• 发表时间: 2023-06-10
• 期刊: Frontiers in Oncology
• 影响因子: 4.7
• 作者: Kazuma Nakatani;Hiroyuki Kogashi;Takanori Miyamoto;T. Setoguchi;Tetsushi Sakuma;Kazuto Kugou;Y. Hasegawa;Takashi Yamamoto;Y. Hippo;Yusuke Suenaga
• 通讯作者: Yusuke Suenaga