S1Pによる歯乳頭由来幹細胞の象牙芽細胞分化誘導と歯髄血管再生療法への応用

S1P诱导牙乳头干细胞成牙本质细胞分化及其在牙髓血管再生治疗中的应用

基本信息

批准号：
20K09969
负责人：
松崎英津子
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Fukuoka Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K09969/
关键词：
再生歯内療法歯乳頭由来幹細胞 S1Pシグナル歯髄血管再生療法 S1P

项目摘要

昨年度に引き続き、マウス歯乳頭尖端前駆細胞 (iSCAP)に、S1PおよびBMP-9を添加し、象牙芽細胞分化に及ぼす影響について検討した。前年度、象牙芽細胞分化マーカー発現が安定しなかったため、石灰化誘導培地下で再検討し、S1P添加後1-14日の象牙芽細胞分化マーカーmRNA発現について解析した。Dentin sialophosphoprotein (DSPP)、Dentin matrix acidic phosphoprotein 1 (DMP-1) mRNA発現は、S1P、BMP-9添加により1日目から有意に増加した。Matrix extracellular phosphoglycoprotein (MEPE) は7日目から発現を認め、S1P、BMP-9添加により14日目で有意に増加した。次に、S1P受容体のひとつであるS1PR1の阻害剤W146を添加すると、S1PによるDSPP、DMP-1発現増加は有意に抑制され、MEPEも抑制傾向を示した。一方で、W146の添加は、BMP-9によるDSPP、DMP-1、MEPEの発現増加に影響を及ぼさなかった。また、DSPPのタンパク質分泌について、ELISA法により検討したところ、S1P添加により3日目で有意に増加した。この発現増加は、mRNA発現と同様にW146添加により有意に抑制された。他方、BMP-9添加により、DSPPタンパク質発現は7日目で増加したが、W146は影響を及ぼさなかった。また、iSCAPを脂肪細胞分化誘導培地下で培養すると脂肪滴が形成され、脂肪細胞に分化した。S1Pの添加により脂肪滴の形成は抑制され、W146を添加するとS1Pによる脂肪的形成抑制作用は阻害された。以上のことから、S1PR1シグナルがiSCAPの象牙芽細胞分化、脂肪細胞分化抑制に関与する可能性が考えられた。

去年之后，将S1P和BMP-9添加到小鼠乳头状祖细胞（ISCAP）中，并检查了对Odontoblast分化的影响。上一年，牙糖细胞分化标记的表达不稳定，因此在钙化诱导培养基下重新检查了结果，并分析了S1P后1-14天的ODONTOBLAST分化标记物的mRNA表达。牙本质唾液磷蛋白（DSPP），牙本质基质酸性磷蛋白1（DMP-1）mRNA表达从第1天开始显着增加，随着S1P和BMP-9的添加。基质外磷脂蛋白（MEPE）从第7天表示，并在第14天增加了S1P和BMP-9。接下来，当添加S1P1的抑制剂W146（S1P受体之一）时，由S1P引起的DSPP和DMP-1表达的增加得到了显着抑制，MEPE也显示出抑制的趋势。另一方面，BMP-9的添加W146对DSPP，DMP-1和MEPE的表达没有影响。此外，当通过ELISA方法检查DSPP蛋白分泌时，第三天的S1P添加显着增加。与mRNA表达相似，通过添加W146可以显着抑制这种增加的表达。另一方面，BMP-9的添加增加了DSPP蛋白在第7天的表达，但W146没有影响。此外，当在脂肪细胞分化诱导培养基下培养ISCAP时，形成脂质液滴并分化为脂肪细胞。 S1P的添加抑制了脂质液滴的形成，W146的添加抑制了S1P对脂质形成的抑制作用。从以上，可以认为S1PR1信号可能参与ISCAP的Odontoblast分化和脂肪细胞分化的抑制。