S1Pによる歯乳頭由来幹細胞の象牙芽細胞分化誘導と歯髄血管再生療法への応用

S1P诱导牙乳头干细胞成牙本质细胞分化及其在牙髓血管再生治疗中的应用

基本信息

批准号：
20K09969
负责人：
松崎英津子
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Fukuoka Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K09969/
关键词：
再生歯内療法歯乳頭由来幹細胞 S1Pシグナル歯髄血管再生療法 S1P

项目摘要

昨年度に引き続き、マウス歯乳頭尖端前駆細胞 (iSCAP)に、S1PおよびBMP-9を添加し、象牙芽細胞分化に及ぼす影響について検討した。前年度、象牙芽細胞分化マーカー発現が安定しなかったため、石灰化誘導培地下で再検討し、S1P添加後1-14日の象牙芽細胞分化マーカーmRNA発現について解析した。Dentin sialophosphoprotein (DSPP)、Dentin matrix acidic phosphoprotein 1 (DMP-1) mRNA発現は、S1P、BMP-9添加により1日目から有意に増加した。Matrix extracellular phosphoglycoprotein (MEPE) は7日目から発現を認め、S1P、BMP-9添加により14日目で有意に増加した。次に、S1P受容体のひとつであるS1PR1の阻害剤W146を添加すると、S1PによるDSPP、DMP-1発現増加は有意に抑制され、MEPEも抑制傾向を示した。一方で、W146の添加は、BMP-9によるDSPP、DMP-1、MEPEの発現増加に影響を及ぼさなかった。また、DSPPのタンパク質分泌について、ELISA法により検討したところ、S1P添加により3日目で有意に増加した。この発現増加は、mRNA発現と同様にW146添加により有意に抑制された。他方、BMP-9添加により、DSPPタンパク質発現は7日目で増加したが、W146は影響を及ぼさなかった。また、iSCAPを脂肪細胞分化誘導培地下で培養すると脂肪滴が形成され、脂肪細胞に分化した。S1Pの添加により脂肪滴の形成は抑制され、W146を添加するとS1Pによる脂肪的形成抑制作用は阻害された。以上のことから、S1PR1シグナルがiSCAPの象牙芽細胞分化、脂肪細胞分化抑制に関与する可能性が考えられた。

继去年之后，我们将S1P和BMP-9添加到小鼠牙乳头顶端祖细胞（iSCAP）中，并研究它们对成牙本质细胞分化的影响。由于前一年成牙本质细胞分化标志物的表达不稳定，我们在矿化诱导培养基下重新检查，并在添加S1P后1至14天分析成牙本质细胞分化标志物mRNA的表达。添加 S1P 和 BMP-9 后，牙本质唾液酸磷蛋白 (DSPP) 和牙本质基质酸性磷蛋白 1 (DMP-1) mRNA 表达从第 1 天起显着增加。基质细胞外磷酸糖蛋白 (MEPE) 从第 7 天开始表达，并在第 14 天随着 S1P 和 BMP-9 的添加而显着增加。接下来，当添加S1P受体之一S1PR1的抑制剂W146时，S1P诱导的DSPP和DMP-1表达的增加被显着抑制，MEPE也显示出被抑制的趋势。另一方面，添加W146并不影响BMP-9诱导的DSPP、DMP-1和MEPE表达的增加。另外，通过ELISA检测DSPP的蛋白分泌，发现添加S1P后第3天DSPP的蛋白分泌显着增加。与 mRNA 表达一样，这种表达的增加被添加 W146 显着抑制。另一方面，BMP-9 添加增加了第 7 天的 DSPP 蛋白表达，但 W146 没有影响。此外，当在脂肪细胞分化诱导培养基下培养iSCAP时，形成脂滴并且iSCAP分化成脂肪细胞。 S1P的添加抑制了脂滴的形成，W146的添加抑制了S1P对脂滴形成的抑制作用。据此认为S1PR1信号可能参与抑制iSCAP的成牙本质细胞分化和脂肪细胞分化。