キレーター含有糖ユニットで修飾した抗体の標識反応と評価

含螯合剂糖单元修饰的抗体的标记反应和评价

• 批准号: 21K07714
• 负责人: 破入 正行
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: National Institutes for Quantum Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07714/
• 关键词: 放射性金属核種; 位置特異的標識; 抗体; 糖鎖; 銅-64; 位置特異的修飾; 糖鎖修飾抗体; 位置特異的修飾方法; PET; 放射性治療核種

放射性核種と抗体との錯形成を行うには、放射性金属捕捉部位であるキレーターをLysやCysの側鎖へ導入する方法が一般的である。しかし、抗体のどの位置にキレーターが導入されたかを確認するには非常に困難であり、またキレーターをもつ抗体の品質にバラツキが生じることも予想できる。そこで位置特異的にキレーターを導入する部位としてAsn側鎖に付加している糖鎖に注目した。今年度は昨年度に続きランダムにキレーターを導入した抗体と糖鎖部分を糖加水分解酵素によって除去した抗体へランダムにキレーターを導入した抗体を標識した化合物のイメージング、アジド基を有する糖鎖の合成及び抗体への導入反応を検討した。キレーターはDFOを用い、放射性核種としてZr-89を使用した。抗体はパニツムマブ、がん細胞としてヒト大腸がん由来DLD-1またはHT-29を藩種したマウスを用いたPETイメージングを行なった。パニツムマブのZr-89標識反応は糖鎖があるなしにかかわらず同様な放射化学的収率および放射化学的純度で標識抗体が得られた。またPET撮像においてもほぼ変わらない動態であった。抗体に導入するオキサゾリン糖鎖の合成は７工程で調製し、糖加水分解酵素であるENGaseを用いて部分的糖鎖加水分解パニツムマブへ導入した。SDS-PAGEを用いて導入効率を確認後、イオンクロマトグラフィーで精製を行い、中程度の収率で得た。次いでクリック反応を用いてパニツムマブ中のアジド基にDOTA誘導体を導入した。精製後、キレーター導入パニツムマブをトリプシン処理した後LC-MSMSで確認したところ不純物が混入していることがわかった。

为了在放射性核素和抗体之间形成复合物，常见的方法是将螯合剂（一种放射性金属捕获位点）引入到Lys或Cys的侧链中。然而，要确认螯合剂被引入到抗体中的位置是极其困难的，并且也可以预期含有螯合剂的抗体的质量会有所不同。因此，我们重点关注与 Asn 侧链相连的糖链作为引入螯合剂的位置特异性位点。今年，继去年之后，我们将重点研究随机引入螯合剂的抗体标记的成像化合物和糖链部分已被糖基水解酶去除的抗体、具有叠氮基团的糖链的合成等。我们研究了引入反应转化为抗体。 DFO用作螯合剂，Zr-89用作放射性核素。使用帕尼单抗作为抗体，并将小鼠与人结肠癌衍生的 DLD-1 或​​ HT-29 作为癌细胞一起孵育，进行 PET 成像。在帕尼单抗的Zr-89标记反应中，无论是否存在糖链，都获得了相似的放射化学产率和放射化学纯度的标记抗体。此外，PET 成像中的动态几乎保持不变。引入抗体的恶唑啉糖链经过七个步骤合成，并引入帕尼单抗，使用糖基水解酶 ENGase 部分水解。使用SDS-PAGE确认导入效率后，使用离子色谱法进行纯化，得到中等收率。接下来，使用点击反应将 DOTA 衍生物引入帕尼单抗的叠氮基团中。纯化后，引入螯合剂的帕尼单抗用胰蛋白酶处理，并通过 LC-MSMS 确认，结果显示其被杂质污染。

项目成果

TRT薬剤211At-AITM 誘導体の合成と評価

TRT药物211At-AITM衍生物的合成与评价

• 发表时间: 2022
• 作者: 破入 正行; 謝 琳; 張 一鼎; 峯岸 克行; 門間 あゆみ; Hu Kuan; 藤永 雅之; 永津 弘太郎; 石岡 典子; 張 明栄
• 通讯作者: 張 明栄

TRT薬剤211At-AITM 誘導体の合成と評価

TRT药物211At-AITM衍生物的合成与评价

• 发表时间: 2022
• 作者: 破入 正行; 謝 琳; 張 一鼎; 峯岸 克行; 門間 あゆみ; Hu Kuan; 藤永 雅之; 永津 弘太郎; 石岡 典子; 張 明栄
• 通讯作者: 張 明栄

Synthesis and evaluation of At-211 labeled TRT-radiopharmaceuticals (At-AITM) for melanoma with overexpressed metabotropic glutamate receptor 1

At-211 标记的 TRT 放射性药物 (At-AITM) 的合成和评估，用于治疗代谢型谷氨酸受体 1 过表达的黑色素瘤

• 发表时间: 2022
• 作者: Hanyu Masayuki; Xie Lin; Yiding Zhang; Minegishi Katsuyuki; Kadoma Ayumi; Hu Kuan; Fujinaga Masayuki; Nagatsu Kotaro; Ishioka Noriko; Zhang Ming
• 通讯作者: Zhang Ming

糖鎖加水分解パニツムマブの標識合成と体内動態

糖基化帕尼单抗的标记合成和药代动力学

• 发表时间: 2022
• 作者: 破入 正行; 謝 琳; 張 一鼎; 森 昌子; 筒井 正斗; 水野 真盛; 張 明栄
• 通讯作者: 張 明栄

Development of a Stable Peptide-Based PET Tracer for Detecting CD133-Expressing Cancer Cells

开发用于检测表达 CD133 的癌细胞的稳定的基于肽的 PET 示踪剂

• DOI: 10.1021/acsomega.1c04711
• 发表时间: 2021
• 影响因子: 4.1
• 作者: Hu Kuan;Ma Xiaohui;Xie Lin;Zhang Yiding;Hanyu Masayuki;Obata Honoka;Zhang Lulu;Nagatsu Kotaro;Suzuki Hisashi;Shi Rui;Wang Weizhi;Zhang Ming
• 通讯作者: Zhang Ming