TET2遺伝子を用いた膠芽腫に対するマルチターゲット脱メチル化遺伝子治療研究

TET2基因治疗胶质母细胞瘤的多靶点去甲基化基因治疗研究

基本信息

批准号：
20K09332
负责人：
草鹿元
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Jichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は, Ten-eleven translocation methylcytosine dioxygenase 2 (TET2)を治療遺伝子とする悪性神経膠腫（膠芽腫）への新規遺伝子治療の基礎研究である．申請者らはこれまで, 癌抑制遺伝子に関する研究からDNAメチル化による癌抑制遺伝子の不活化が膠芽腫の発症に関わると考えている．膠芽腫の標準治療は既に確立されているが，その予後は不良であり，新たな治療戦略の開発が望まれる．膠芽腫は多くの癌抑制遺伝子が不活化されており，効果的な分子標的治療には同時に多数の癌抑制遺伝子を活性化する必要がある．TET2は脱メチル化酵素でありメチル化で不活化した複数の癌抑制遺伝子を同時に活性化できるため膠芽腫治療に適した治療遺伝子である．TET2遺伝子による遺伝子治療の開発は新たな膠芽腫治療の進歩に大きく寄与するものと思われる．このTET2を治療遺伝子とする膠芽腫に対する遺伝子治療の有用性を明らかにすることが今回の研究の目標である．具体的には以下の点を明らかにすることを目的として研究を行ってきた．1. 膠芽腫におけるTET2の意義を確認するために膠芽腫細胞でのTET2遺伝子発現と5hmC量を測定すること．2. TET2低発現細胞にTET2を遺伝子導入し，TET2高発現細胞株を作成すること．3. その細胞に対して次世代シークエンサーを用い親細胞と遺伝子挿入細胞のメチル化パターンの違いについて解析すること．4. これによりTET2遺伝子導入の過程で遺伝子全体のメチル化度の変化とmRNAの変化を確認すること．5.GALR1, GALR2, COL1A2, TAC1, SSTRなどの数種の癌抑制遺伝子については作用の再活性化を検討すること．このようにして新たな膠芽腫遺伝子治療開発の基礎とする予定である．

本研究是以10-11易位甲基胞嘧啶双加氧酶2（TET2）为治疗基因，对恶性胶质瘤（胶质母细胞瘤）进行新型基因治疗的基础研究。基于对抑癌基因的研究，申请人认为DNA甲基化导致的抑癌基因失活与胶质母细胞瘤的发生有关。尽管胶质母细胞瘤的标准治疗已经建立，但预后较差，需要开发新的治疗策略。胶质母细胞瘤中许多抑癌基因失活，有效的分子靶向治疗需要同时激活许多抑癌基因。 TET2是一种去甲基化酶，可以同时激活多个因甲基化而失活的抑癌基因，使其成为胶质母细胞瘤治疗的合适治疗基因。使用 TET2 基因的基因治疗的发展预计将极大地促进新的胶质母细胞瘤治疗的进步。本研究的目的是阐明使用 TET2 作为治疗基因对胶质母细胞瘤进行基因治疗的有用性。具体来说，我们进行了研究，目的是澄清以下几点。 1.检测胶质母细胞瘤细胞中TET2基因表达量和5hmC含量，以证实TET2在胶质母细胞瘤中的意义。 2. 将 TET2 转染至低 TET2 表达的细胞中，以创建高 TET2 表达的细胞系。 3. 使用下一代测序仪分析亲本细胞和插入基因的细胞之间甲基化模式的差异。 4. 由此确认TET2基因导入过程中整个基因甲基化程度的变化以及mRNA的变化。 5. 考虑重新激活几个肿瘤抑制基因，例如 GALR1、GALR2、COL1A2、TAC1 和 SSTR。这样，我们计划以此为基础来开发新的胶质母细胞瘤基因疗法。