脳梗塞発生時におけるプロポフォールの脳保護作用メカニズム

异丙酚对脑梗死的脑保护作用机制

• 批准号: 20K09238
• 负责人: 三井 一葉
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: University of Yamanashi
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K09238/
• 关键词: 脳梗塞; プロポフォール; Toll like receptor 4

脳梗塞は周術期に発症しやすく、患者の生命予後に重大な影響を及ぼす。脳梗塞増悪の重要な因子に炎症があり、脳内に存在するToll like receptor4（TLR4）は炎症を惹起する。我々は野生型マウスとTLR4ノックアウトマウスにプロポフォールを投与し、プロポフォールがTLR4経路抑制を通じて脳梗塞に保護的に作用することを示した。本研究の目的はノックアウトマウス・免疫染色・リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応を用いて、TLR4を通じたプロポフォールによる脳梗塞への保護作用の具体的なターゲット細胞、その際のTLR4下流経路を検証することである。一昨年度は、プロポフォールを投与することにより脳梗塞を発症したのちに、脳梗塞巣周辺で産生される炎症性サイトカインが低下するか検証した。RT-PCR装置を用いて各炎症性サイトカインがどの程度発現しているか比較検討した結果、コントロール群に比較して、プロポフォールを投与した野生型マウスにおいて炎症性サイトカインであるIL-6が有意に低下していること確認した。このことより、野生型マウスにプロポフォールを投与すると脳梗塞に対して保護的に作用する機序として、炎症性サイトカイン低下の可能性が確認された。昨年度より継続して、脳梗塞巣への炎症性細胞の集簇はプロポフォール投与により減少するか確認するため、免疫蛍光染色法を用いて検討を行った。十分な麻酔深度にした野生型マウスに左総頚動脈結紮および左中大脳動脈焼灼を行うことにより脳梗塞モデルマウスを作製した。同マウスを作製後1日目に安楽死させ脳サンプルを摘出した。抗TLR4抗体・抗CD11b抗体を用いて染色を行った。コントロールマウスと比較して、プロポフォール投与マウスはペナンブラのTLR4発現ミクログリア数が有意に少ないことを確認した。

脑梗塞可能会在围手术期发展，并对患者的生活预后产生重大影响。脑梗塞加剧的重要因素是炎症，大脑中存在类似Toll样受体4（TLR4）会引起炎症。我们对野生型小鼠和TLR4敲除小鼠施用了丙泊酚，表明丙泊通过抑制TLR4途径在脑梗塞上的保护作用。这项研究的目的是使用基因敲除小鼠，免疫染色和实时聚合酶链反应来验证丙醇对通过TLR4的保护作用的特定靶细胞，以及TLR4的下游途径。两年前，我们检查了丙泊酚后脑梗塞周围产生的炎症细胞因子是否导致脑梗塞周围产生的炎性细胞因子的数量减少。我们比较并检查了使用RT-PCR装置表达每种炎症性细胞因子的程度，并发现与对照组相比，野生型小鼠施用的野生型小鼠中炎性细胞因子IL-6显着降低。这证实了炎症性细胞因子作为一种机制降低的可能性，该机制可在给野生型小鼠丙泊时预防脑梗塞。从去年开始，我们使用免疫荧光染色进行了一项研究，以确认炎症细胞的积累是否随着丙泊酚的给药而减少。通过在野生型小鼠上结扎左颈动脉和左脑动脉消融，制备了模型的大脑梗塞，并具有足够的麻醉深度。在制备小鼠后的第一天，将脑样品安乐死并提取。使用抗TLR4和抗CD11b抗体进行染色。与对照小鼠相比，已经证实，在丙泊酚治疗的小鼠中表达的小胶质细胞的数量明显降低。