細胞老化と個体老化へのチミジンホスホリラーゼの影響

胸苷磷酸化酶对细胞衰老和个体衰老的影响

• 批准号: 21K07392
• 负责人: 中島 融一
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: University of Miyazaki
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07392/
• 关键词: 細胞老化; 健康寿命; チミジンホスホリラーゼ

チミジンホスホリラーゼノックアウト（TP KO）マウスと野生型マウスの生存曲線（平均寿命）の観察において、TP KOマウス群（n数＝110匹）は野生型マウス群（n数=80匹）に比べ、僅かながらも有意に寿命の延長が認められた。さらに、60～80週齢にかけて、野生型マウス群よりもTP KOマウス群の生存曲線は、その下降頻度が緩やかであり、この時期の両群間の被毛状態や運動量、行動性の活発さにも差が認められた。同週齢のTP KOマウスおよび野生型マウスから採材した背部皮膚、心臓、肝臓、脾臓、小腸および大腿部骨格筋の各組織のTP、老化マーカーであるp16 (Cdkn2a/Ink4a)およびp21（CIP1/WAF1）のｍRNA発現をRT-PCR法により、蛋白質発現の差異をWestern blot法により検出した。老齢期の野生型マウスは肝臓や脾臓の組織においてTPと老化マーカーとの相関が確認された。一方、TP KOマウスのこれら臓器の老化マーカーは野生型マウスに比較し、有意に低い発現量であった。併せてSenescence-associated secretory phenotype（SASP）に含まれる因子群の検出を試みたところ、FGF2、IL-8、およびβ1インテグリン等の発現の差異が認められた。また、近年、抗老化作用の標的として注目されているチロシンキナーゼファミリーとTPとの関連性が示唆される結果を得た。細胞レベルでの確認のため、マウスの正常な培養線維芽細胞を100～120回継代して得た継代老化細胞を用いてTPの発現量の変化を調べた。細胞老化に伴いTPは高発現しており、TP KOマウスから採材した初代皮膚線維芽細胞も用いて、上記のSASP因子やチロシンキナーゼファミリーとTPとの関連性について調べている。

观察胸苷磷酸化酶敲除（TP KO）小鼠和野生型小鼠的生存曲线（平均寿命），TP KO小鼠组（n = 110只小鼠）的存活率略低于野生型小鼠组（n = 110只）。 = 80 只小鼠）然而，观察到寿命显着延长。此外，从60周龄到80周龄，TP KO小鼠组的生存曲线比野生型小鼠组下降得更慢，表明两组小鼠在生长期间的皮毛状况、运动量和行为活动之间存在差异。也观察到了这一时期的差异。 RT-PCR检测TP、衰老标志物p16（Cdkn2a/Ink4a）、p21（CIP1/WAF1）mRNA表达量，Western blot检测蛋白表达差异。在老年野生型小鼠的肝脏和脾脏组织中证实了 TP 与衰老标志物之间的相关性。另一方面，TP KO小鼠这些器官中衰老标志物的表达水平显着低于野生型小鼠。我们还尝试检测衰老相关分泌表型 (SASP) 中包含的一组因素，并发现 FGF2、IL-8 和 β1 整合素的表达存在差异。此外，结果表明TP与酪氨酸激酶家族之间存在关系，酪氨酸激酶家族最近作为抗衰老作用的靶点而受到关注。为了在细胞水平上证实这一点，我们使用正常培养的小鼠成纤维细胞传代100至120倍而获得的衰老细胞检查了TP表达水平的变化。 TP随着细胞老化而高表达，我们正在利用从TP KO小鼠收集的原代皮肤成纤维细胞来研究TP与上述SASP因子和酪氨酸激酶家族之间的关系。