脳梗塞の病態進行における卵巣ホルモン－細胞免疫相互作用の役割

卵巢激素与细胞免疫相互作用在脑梗死病理进展中的作用

基本信息

批准号：
21K07306
负责人：
長谷川潤
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kobe Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、発症後の脳梗塞の病態進行に、卵巣ホルモン及び細胞性免疫がどのように関与するか、またホルモン療法が脳梗塞の予後を左右するかを明らかにすることを目的としている。2022年度は、卵巣摘出を施した雌マウスに光血栓性脳梗塞モデルを作製し、その後7日目までエストラジオール（E2）又は溶媒を投与することで、雌マウスにおけるエストラジオールの効果を検討した。その結果、E2投与マウスではミクログリアの活性化が抑制された一方、アストロサイトの反応性が上昇していることが分かった。我々はこれまでに、光血栓性脳梗塞モデルにおいては、ミクログリアの活性とアストロサイトの反応性が逆相関することを見出しており（Kondo et al., 2022）、本結果も同様の結果を示していた。一方、光血栓性脳梗塞モデルを作製した雄マウスにE2を投与し、7日後の脳梗塞部位の状態を観察したところ、卵巣摘出雌マウスほどE2の顕著な効果は認められなかった。このことからE2の効果は卵巣ホルモン以外の性差因子により影響を受けることが分かった。卵巣摘出雌マウスの脳梗塞部位から抽出したRNAを試料としてRT-PCR法を用いたcandidate screeningを行い、E2が発現に影響する分泌因子の同定を行ったところ、いくつかの炎症性サイトカイン類が候補因子として見つかった。現在、雄マウスからのRNAを用いて検証を行い、E2による脳梗塞部位炎症反応抑制に関与すると考えられるサイトカインの確定を試みているところである。細胞性免疫については、脳梗塞作製後7日目、14日目の組織切片を、抗CD3，CD4，CD8抗体を用いた免疫染色を行ったが、脳梗塞部位には明確なシグナルは観察されなかった。従って、光血栓性脳梗塞モデルにおける脳炎症には、Ｔ細胞の関与は薄いと考えている。

本研究的目的是阐明卵巢激素和细胞免疫如何参与脑梗死发病后的病理进展，以及激素治疗是否影响脑梗死的预后。 2022财年，我们在切除卵巢的雌性小鼠中建立了光血栓性脑梗塞模型，然后给予雌二醇（E2）或媒介物直至第七天，以检查雌二醇对雌性小鼠的影响。结果表明，虽然 E2 治疗小鼠的小胶质细胞活化受到抑制，但星形胶质细胞的反应性却增加。我们之前发现，在光血栓性脑梗死模型中，小胶质细胞活性和星形胶质细胞反应性呈负相关（Kondo et al., 2022），我们的结果也显示出类似的结果。另一方面，当对建立光血栓性脑梗塞模型的雄性小鼠施用E2并在7天后观察脑梗塞部位的状况时，E2的效果不如切除卵巢的雌性小鼠那样明显。这表明E2的作用受到卵巢激素以外的性别特异性因素的影响。使用从卵巢切除的雌性小鼠的脑梗塞部位提取的RNA进行利用RT-PCR的候选筛选，以鉴定影响E2表达的分泌因子，并检测到几种炎症细胞因子作为候选因子。我们目前正在使用雄性小鼠的RNA进行验证，并试图鉴定被认为与E2抑制脑梗塞部位炎症反应有关的细胞因子。关于细胞介导的免疫，脑梗塞后7天和14天采集的组织切片使用抗CD3、CD4和CD8抗体进行免疫染色，但在脑梗塞部位没有观察到明确的信号。因此，我们认为T细胞在光血栓性脑梗死模型中仅轻微参与脑部炎症。