Inverted apicobasal polarity of lung micropapillary adenocarcinoma-like organoids and its relationship to metastasis

肺微乳头状腺癌样器官的顶基底极性反转及其与转移的关系

• 批准号: 21K07098
• 负责人: 梅田 大介
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07098/
• 关键词: 微小乳頭がん; 上皮頂底極性; 低酸素; 細胞外基質; 三次元培養; 免疫回避; NK細胞; MUC1; がん転移; 上皮極性; オルガノイド

肺微小乳頭がん（micropapillary carcinoma: MPC）のin vitro 培養モデル構築を目指して研究を行った結果、細胞株Aを低酸素下で細胞外基質Mを用いた三次元培養することにより、反転極性を呈するMPC様構造を誘導することに成功した。以上の研究内容を「MPC様構造体の製造方法」として発明特許出願している。さらに、MPC様構造誘導には転写因子Hが重要であることをCRISPR/Cas9を用いた転写因子Hノックアウト細胞を作製し、証明した。一方で、RhoファミリーGタンパク質であるRhoA、Rac1およびCDC42の活性調節はMPC構造に重要な上皮頂底極性形成に関与することが報告されている。本研究では、RhoAやそのeffector分子であるRho-kinase（ROCK）が上記条件によるMPC様構造誘導に関与することを、各種ROCK阻害薬やRhoAのdominant negative変異体を用いて明らかにした。MPCの悪性化機構として、免疫回避能亢進に着目し研究を行った。その結果、MPC様構造体は2D培養体と比較して、Natural killer（NK）細胞の細胞障害活性に対する感受性が顕著に低下していることを明らかにした。また、上記感受性低下には転写因子Hが重要であることも明らかにした。以上の結果は、MPCの悪性化機構として、NK細胞に対する感受性低下による免疫回避能亢進が関与することおよび上記感受性低下にはMPCの立体構造が重要であることを示唆している。

作为旨在构建肺微乳头状癌（MPC）体外培养模型的研究结果，我们发现通过在缺氧条件下使用细胞外基质M在三维空间中培养细胞系A，我们能够实现反转极性。诱导类似 MPC 的结构我们已经为上述研究提交了一项发明专利申请，名为“制造类MPC结构的方法”。此外，我们通过使用 CRISPR/Cas9 生成转录因子 H 敲除细胞，证明转录因子 H 对于诱导 MPC 样结构非常重要。另一方面，有报道称，Rho家族G蛋白RhoA、Rac1和CDC42活性的调节参与上皮顶端基底极性的形成，这对MPC结构很重要。在本研究中，我们使用各种 ROCK 抑制剂和 RhoA 的显性失活突变体证明，RhoA 及其效应分子 Rho 激酶 (ROCK) 参与在上述条件下诱导 MPC 样结构。我们的研究重点是增强免疫逃逸作为 MPC 恶性的机制。结果表明，与 2D 培养物相比，MPC 样结构对自然杀伤 (NK) 细胞的细胞毒性活性的敏感性显着降低。我们还发现转录因子 H 对于上述敏感性降低很重要。上述结果表明MPC的恶性转化机制涉及由于对NK细胞敏感性降低而导致的免疫逃避能力增强，并且MPC的三维结构对于上述敏感性降低具有重要意义。

项目成果

肺微小乳頭 癌の三次元培養モデルに関する研究

肺微乳头状癌三维培养模型的研究

• 发表时间: 2022
• 作者: 梅田大介;森井英一
• 通讯作者: 森井英一

ＭＰＣ様構造体の製造方法

类MPC结构的制造方法

• 发表时间: 2022