ヒトパピローマウイルス潜伏持続感染に関与する転写因子の探索

寻找参与潜伏持续性人乳头瘤病毒感染的转录因子

基本信息

批准号：
21K07047
负责人：
石井克幸
金额：
$ 2.66万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07047/
关键词：
HPV 複製 LCR 転写因子 HOXC13 潜伏持続感染

项目摘要

HPV16,18型初期遺伝子プロモーターの活性化に関わる新規転写因子を探索した。HPVゲノム複製と保持能を有するヒト角化細胞NIKSの網羅的遺伝子発現解析とHPV初期プロモーター制御領域(LCR)結合転写因子予測から、JDP2, CEBPD, FOXL1, FOXP3, HOXC10, MAFB, ZNF750, FOXO1, LYL1, GTF2F2, TSC22D3, ZFP42を選択した。ここから、siRNAによる遺伝子ノックダウンとルシフェラーゼをレポーターにした初期遺伝子プロモーター活性測定および定量PCRによるHPV初期遺伝子発現解析によりJDP2, DEBPD, LYL1まで絞った。HOXC13とJDP2, DEBPD, LYL1の発現ベクターをそれぞれNIKS細胞に導入し、HPV16, 18型のプロモーター活性を測定した。HOXC13のベクターは活性を上昇させたが、JDP2, DEBPD, LYL1には変化がなかった。HOXC13発現ベクターを子宮頸外部細胞Ect1および子宮頸内部細胞End1に導入し、HPV16,18型のプロモーター活性を測定した。Ect1, End1ともに活性の上昇が観測され、特にEct1細胞における16型プロモーター活性の上昇が顕著であった。HOXC13はHPV16,18型の初期遺伝子の発現を正に調節することが遺伝子導入実験でも示された。HOXC13ノックアウトNIKS細胞(NIKS/HOXC13-KO細胞)をレンチウイルスによるCRISPR/Cas9システムで作成した。

我们寻找参与 HPV16 和 18 早期基因启动子激活的新型转录因子。对具有 HPV 基因组复制和保留能力的人角质形成细胞 NIKS 进行全面的基因表达分析，并预测 HPV 早期启动子控制区 (LCR) 结合转录因子，结果显示 JDP2、CEBPD、FOXL1、FOXP3、HOXC10、MAFB、ZNF750、FOXO1、选择了 LYL1、GTF2F2、TSC22D3 和 ZFP42。由此，我们通过使用 siRNA 的基因敲除、使用荧光素酶作为报告基因的早期基因启动子活性测量以及使用定量 PCR 的 HPV 早期基因表达分析，将列表范围缩小到 JDP2、DEBPD 和 LYL1。将HOXC13、JDP2、DEBPD和LYL1的表达载体导入NIKS细胞，并测量HPV16和18的启动子活性。 HOXC13 载体活性增加，但 JDP2、DEBPD 和 LYL1 没有变化。将HOXC13表达载体导入宫颈宫颈外细胞Ect1和宫颈内细胞End1，测定HPV16、18型的启动子活性。观察到Ect1和End1的活性均增加，其中Ect1细胞中16型启动子活性的增加尤其显着。基因转移实验还表明HOXC13正向调节HPV 16和18型早期基因的表达。 HOXC13 敲除 NIKS 细胞（NIKS/HOXC13-KO 细胞）是使用基于慢病毒的 CRISPR/Cas9 系统创建的。