腸炎ビブリオ菌の感染過程における粘性環境応答と病原性発揮機構の解明

副溶血性弧菌感染过程中粘性环境反应及致病机制的阐明

基本信息

批准号：
21K07022
负责人：
寺島浩行
金额：
$ 2.5万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

腸炎ビブリオは、魚介類を汚染しヒトに炎症性の下痢を引き起こす病原細菌である。III型分泌装置が病原性に深く関与しており、これを使って宿主腸管細胞内へ直接病原タンパク質を送り込むことができる。このような感染様式を持つため、病原性の発揮には上皮細胞の表面まで移動することが重要となる。そこで、腸炎ビブリオの運動・生理活性の変化のような「感染の前提条件」について解析し、腸炎ビブリオ感染症の分子メカニズムでの理解を目指す。本年度は、側べん毛の発現を制御するscrAscrBscrCの解析を行った。ScrBおよびScrCのペリプラズムドメインの過剰発現系を作成し、タンパク質精製を行った。多量のタンパク質の精製に成功し、結晶化を試した。ScrBの微結晶を得ることができた。今後、ScrAとシグナル分子の同定を視野に入れ、機能・構造解析を進める。走化性は、好ましい物質・環境へ近づき、好ましくない物質・環境から遠ざかる能力のことである。そのため、走化性が機能し、腸管上皮細胞へ導かれるのではないかと考えられる。そこで、腸内に存在する様々な代謝物や構成要素に対して走化性を示すかどうか解析した。キャピラリーアッセイで評価した結果、乳酸などの代謝産物・中間代謝物などに対して誘引応答あるいは忌避応答を示した。次に、受容体のメチル化修飾アッセイによって、走化性物質と走化性受容体のペアの同定を行った。VP183とピルビン酸・乳酸の組み合わせなど、複数の認識ペアを同定することに成功した。今後さらに詳細な応答プロファイルの一覧を作成し、腸内での腸炎ビブリオの環境応答について明らかにする。

副溶血弧菌是一种致病菌，会污染海鲜并引起人类炎症性腹泻。 III型分泌装置与致病性密切相关，可用于将致病蛋白直接递送至宿主肠细胞中。由于这种感染模式，迁移到上皮细胞表面对于致病性很重要。因此，我们将分析副溶血性弧菌的运动和生理活性的变化等“感染的前提条件”，旨在了解副溶血性弧菌感染的分子机制。今年，我们分析了控制侧鞭毛表达的 scrAscrBscrC。我们为 ScrB 和 ScrC 的周质结构域创建了一个过表达系统，并进行了蛋白质纯化。他们成功纯化了大量蛋白质并尝试结晶。我们能够获得 ScrB 的微晶。未来，我们将继续进行功能和结构分析，以鉴定ScrA和信号分子。趋化性是指接近有利的物质和环境并远离不利的物质和环境的能力。因此，人们认为趋化性可能发挥作用并导致肠上皮细胞。因此，我们分析了它们是否对肠道中存在的各种代谢物和成分表现出趋化性。通过毛细管测定评估的结果显示，它对代谢物和中间代谢物如乳酸表现出吸引或排斥反应。接下来，我们通过受体甲基化修饰测定鉴定了趋化剂和趋化受体对。我们成功识别了多个识别对，包括 VP183 和丙酮酸/乳酸的组合。将来，我们将创建更详细的反应概况列表，并阐明副溶血性弧菌在肠道中的环境反应。