新規修飾法による中和抗体に排除されないAAVベクターの開発と安全性の検討

使用新的修饰方法开发不会被中和抗体消除的 AAV 载体并研究安全性

基本信息

批准号：
21K06823
负责人：
平本貴史
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Jichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06823/
关键词：
AAVベクターエクソソーム遺伝子治療

项目摘要

【本年度実施内容の概要】本研究は、エクソソームに内包したアデノ随伴ウイルスベクター（exoAAVベクター）表面を修飾することで、標的組織への感染効率の上昇、および特異性の向上を目的とする。本年度は、昨年度の結果を受けて選定したエクソソーム表面上の抗原の改変を行った。短い細胞外ループ構造と長い細胞外ループ構造で、それぞれ肝臓特異的修飾タンパク質を結合させることで、ベクター表面を修飾したexoAAVベクターを構築した。それぞれの細胞外ループ単独に修飾したベクター、および両方を修飾したベクターで、受容体強制発現細胞への感染効率を検討したところ、すべての修飾exoAAVベクターは、未修飾exoAAVベクターより高い感染効率を示した。また、それぞれの修飾法による違いは認められなかった。また、エクソソーム表面の別の受容体に着目し、CD19に対する単鎖抗体（scFV）でexoAAVベクター表面を修飾する方法を検討した。昨年度より検討していた方法と同様に、AAVベクター産生細胞の細胞膜を修飾することで、exoAAVベクター表面にscFVを発現するexoAAVベクターを作製することができた。また、scFV修飾exoAAVベクターを評価する系として、CD19抗原を発現する腫瘍細胞を樹立し、感染効率の検討を行った。その結果、scFV修飾exoAAVベクターは、未修飾exoAAVベクターと比較して高い感染効率を示すことが明らかになった。

【今年活动概要】本研究旨在通过修饰封装在外泌体中的腺相关病毒载体（exoAAV载体）的表面，提高对靶组织的感染效率并提高特异性。今年，我们对根据去年的结果选择的外泌体表面的抗原进行了修饰。我们构建了一个 exoAAV 载体，通过将肝脏特异性修饰蛋白与短和长细胞外环结构结合来修饰其表面。当我们使用仅用每个细胞外环修饰的载体和用两者修饰的载体检查强制受体表达的细胞的感染效率时，所有修饰的exoAAV载体都表现出比未修饰的exoAAV载体更高的感染效率。此外，每种修饰方法之间没有观察到差异。我们还关注外泌体表面的另一种受体，并研究了用抗 CD19 的单链抗体（scFV）修饰 exoAAV 载体表面的方法。与我们去年以来一直在研究的方法类似，我们能够通过修饰AAV载体产生细胞的细胞膜来创建在exoAAV载体表面表达scFV的exoAAV载体。此外，作为评估scFV修饰的exoAAV载体的系统，我们建立了表达CD19抗原的肿瘤细胞并检查了感染效率。结果表明，与未修饰的 exoAAV 载体相比，scFV 修饰的 exoAAV 载体表现出更高的感染效率。