Elucidation of the effect of E4BP4 on the development of atherosclerosis

阐明 E4BP4 对动脉粥样硬化发展的影响

基本信息

批准号：
20K08433
负责人：
磯田菊生
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでの研究で炎症を促進するTh1細胞を持続的に刺激すると、E4BP4というタンパク質がTh1細胞に発現し、抗炎症性サイトカインのIL-10を産生することが報告されていた。これは炎症が遷延化するとTh1細胞にE4BP4が発現し、抗炎症作用を惹起すると考えられていた。そこで申請者は血管系の慢性刺激としてカフによる外膜刺激を加え、野生型マウスではこれらの慢性刺激によりE4BP4が誘導され、内膜肥厚が抑制されるのではないかという仮説の実証を行った。申請者らが長年施行しているカフ傷害モデルとは、麻酔下でマウス大腿動脈に長さ2mm×内腔0.56mmのポリエチレンカフを巻き、切開した筋膜と皮膚を縫合したのち2週間飼育する方法である。このモデルではポリエチレンカフを動脈の閉塞をきたさない程度に巻くことで、慢性的な外膜刺激を与えることになり、野生型マウスではE4BP4タンパクが誘導され炎症抑制に働くが、E4BP4欠損マウスでは抗炎症効果が得られないため、炎症が遷延・増強すると予想していた。実際カフ傷害をE4BP4欠損マウスと野生型マウスに加えたところ、仮説とは逆にE4BP4欠損マウスの方が、傷害血管の炎症が少なく、内膜肥厚が抑制されていた。得られた組織の内膜肥厚の定量評価および統計解析を加え、統計的な有意差を得ることができた。免疫染色による検討でもE4BP4欠損マウスでは、炎症性サイトカインの発現が抑制されていることが示された。更に並行して検討している動脈硬化モデルマウスであるApoE欠損マウスとE4BP4/ApoEダブル欠損マウスを用いた動脈硬化形成実験においてもE4BP4を欠損させると動脈硬化形成領域が減少することが示された。以上より、E4BP4は刺激に対して炎症を促進する可能性が示唆される結果が得られた。

先前的研究报告说，促进炎症的Th1细胞的持续刺激会产生抗炎细胞因子IL-10。当炎症持续存在时，这被认为会导致在Th1细胞中表达E4BP4，从而导致抗炎特性。因此，申请人用袖带施加了外膜刺激，作为对脉管系统的慢性刺激，并证明了野生型小鼠的这些慢性刺激可以诱导E4BP4并抑制内膜增厚的假设。申请人多年来使用的袖口损伤模型是一种方法，其中将2 mm长的x 0.56 mm管腔套管在麻醉下包裹在小鼠股动脉周围，并缝合切开的筋膜和皮肤，然后饲养两周。在该模型中，通过将聚乙烯袖带包裹到不能阻断动脉的程度，它将提供慢性外膜刺激，而在野生型小鼠中，E4BP4蛋白会诱导和抑制炎症，但在E4BP4缺乏的小鼠中，这种炎症会延长并增强，因为它会延长蚂蚁。实际上，与假设相比，当将袖口损伤添加到E4BP4缺陷的小鼠和野生型小鼠中时，E4BP4缺陷的小鼠的受伤血管的炎症较小，而降低了小鼠的炎症。添加了所获得组织的内膜增厚的定量评估和统计分析以获得统计显着性。免疫染色还表明，炎症细胞因子的表达在E4BP4缺陷型小鼠中被抑制。此外，在使用APOE缺陷型小鼠和E4BP4/APOE双重缺陷小鼠对动脉粥样硬化模型的平行研究中，还表明E4BP4的缺乏降低了动脉粥样硬化的形成区域。从以上，结果表明E4BP4可能会响应刺激而促进炎症。