Functional analysis of anti-inflammatory protein contained in fish meat water-soluble fraction and its utilization for prevention of non-communicable diseases

鱼肉水溶性部分抗炎蛋白的功能分析及其预防非传染性疾病的应用

基本信息

批准号：
21K05765
负责人：
佐伯宏樹
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

（1）魚類水溶性タンパク質（WSP）に含まれる各種タンパク質の抗炎症作用について，昨年度のミオシン軽鎖に続いて今年は，パルブアルブミン（PA）を人工消化系に供した後，得られた消化物をLPS-刺激マクロファージに作用させ，炎症性サイトカインの分泌抑制作用を調べた。その結果， PAはWSPほどの強いTNF-α産生抑制作用を示さなかったものの，インターロイキン（IL）-6産生を強く抑制した。さらに，同一タンパク質濃度で比較すると，PAはWSPよりも強い抗炎症機能を有していた。TNF-α は炎症反応の開始時にマクロファージから分泌されるので，PAが炎症開始段階の制御に関与している可能性は低い。それゆえ，PAは，TNF-aの分泌によって炎症反応が進行してIL-6が分泌された段階で，抗炎症機能を発現する可能性がある。（2）WSPの主成分がフルクトース2リン酸アルドラーゼとクレアチンキナーゼ（一部断片）であることを，LC-MS/MSによって同定した。この知見をもって2023年度の各成分の機能分析に臨む。（3）昨年度WSPの抗炎症作用を増強させる目的で，メイラード反応を用いた糖鎖導入の効果を見いだしたので，本年度はさらに詳細な検証をおこなった。WSPに対して1／2重量のアルギン酸オリゴ糖（AO：各種タンパク質の抗炎症作用を増強した実績のある被修飾糖）を混合してから凍結乾燥し，これを60℃―相対湿度65％で保持し，経時的にAOが結合したWSPを得た（WSP-AO）。そこで，この抗炎症作用を調査したところ，WSP-AOのTNF-α産生抑制作用は，濃度依存的に増強され，反応6時間で抗炎症作用はほぼ最大値に達した。この時点では，メイラード反応の進行を示す褐変化は顕著に進行していないことから，AO導入は，メイラード反応の初期から中期段階において，充分な抗炎症作用の増強効果を発揮すると判断した。

（1）关于鱼水溶性蛋白（WSP）中各种蛋白质的抗炎作用，继去年的肌球蛋白轻链之后，今年我们将研究鱼水溶性蛋白中各种蛋白质的抗炎作用。将该物质应用于LPS刺激的巨噬细胞，并研究其对炎症细胞因子分泌的抑制作用。结果，尽管PA没有表现出与WSP一样强的抑制TNF-α产生的效果，但它强烈抑制白细胞介素(IL)-6的产生。此外，当比较相同的蛋白质浓度时，PA比WSP具有更强的抗炎功能。由于TNF-α是在炎症反应开始时由巨噬细胞分泌的，因此PA不太可能参与控制炎症的初始阶段。因此，PA可能在由于TNF-α和IL-6的分泌而导致炎症反应进展的阶段发挥抗炎功能。 (2)通过LC-MS/MS鉴定WSP的主要成分是果糖二磷酸醛缩酶和肌酸激酶(部分片段)。有了这些知识，我们将在 2023 年对每个组件进行功能分析。 (3)去年我们发现了利用美拉德反应引入糖链以增强WSP抗炎作用的效果，所以今年我们进行了更详细的验证。 WSP与1/2重量的海藻酸低聚糖（AO：一种改性糖，具有增强各种蛋白质抗炎作用的良好记录）混合，然后冷冻干燥，然后在60°C和65%的温度下干燥获得随着时间的推移结合 AO 的 WSP (WSP-AO)。因此，当我们研究这种抗炎作用时，我们发现WSP-AO的TNF-α产生抑制作用以浓度依赖性方式增强，并且在反应6小时时抗炎作用几乎达到其最大值。此时，表明美拉德反应进展的褐变尚未显着进展，因此判断AO的引入在美拉德反应的早期至中期具有充分的增强抗炎作用的效果。