比較ゲノミクスから探る育種モデル食用菌の生殖成長相転換機構の全容解明

利用比较基因组学彻底阐明育种模型食用菌的生殖生长相变机制

基本信息

  • 批准号：
    21K05530
  • 负责人：
    種坂 英次
  • 金额：
    $ 2.66万
  • 依托单位：
    Kindai University
  • 依托单位国家：
    日本
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
  • 财政年份：
    2021
  • 资助国家：
    日本
  • 起止时间：
    2021-04-01 至 2024-03-31
  • 项目状态：
    已结题

项目摘要

昨年度までに、エノキタケの子実体形成株（正常株n）および子実体形成不全株（変異株d3, d4, d5）について、フラスコ内での子実体形成系を構築した。また、RNA-seq解析から、正常株の子実体形成期に特異的に発現する2つの遺伝子、Fv.FDS（Flammulina development specific gene）およびハイドロフォビンFv.hyd1を子実体形成関連遺伝子として特定した。2022年度はこれらの遺伝子の機能解析を目的として、FDS過剰発現株とノックアウト系統の作出を実施した。プロトプラスト-PEG法によって、変異株d3にFDS過剰発現カセットを導入した形質転換体Td3を作出した。Td3ではフラスコ内での子実体形成は観察できなかったものの、オガクズを含む菌床培地では正常株と同様に子実体を形成したことから、FDSは子実体形成に大きく関与する遺伝子であることを示した。一方、ノックアウト系統の作出においては遺伝子ターゲティング効率を減少させる非相同末端結合遺伝子の破壊に着手した。単核性発茸系統についてプロトプラスト-PEG法で非相同末端結合遺伝子Fv.LigIVの破壊用コンストラクトを導入した。形質転換後、ハイグロマイシンを含む選択培地に出現したコロニーを分離した。得られたFv.LigⅣ 破壊候補系統について、UV照射した菌糸体からRNAを抽出し、RT-PCRにてFv.LigⅣの発現確認を行った。その結果、一次スクリーニングで得られた904系統のうちの1系統においてFv.LigⅣ の破壊をゲノムレベルで確認するとともに、RT-PCRによりFv.LigⅣ 発現のノックアウトを確認した。
到去年，我们在烧瓶中为能形成子实体的金针菇菌株（正常菌株n）和不能形成子实体的菌株（突变菌株d3、d4和d5）构建了子实体形成系统。此外，通过RNA-seq分析，我们鉴定了在正常菌株子实体形成阶段特异表达的两个基因：Fv.FDS（金针菇发育特异性基因）和疏水蛋白Fv.hyd1，作为与子实体形成相关的基因。 。 2022年，我们创建了FDS过表达系和敲除系，用于这些基因的功能分析。通过使用原生质体-PEG 方法将 FDS 过表达盒引入突变株 d3 中，创建了转化体 Td3。尽管在Td3中在烧瓶中观察不到子实体形成，但在含有锯末的真菌床培养基中以与正常菌株相同的方式形成子实体，表明FDS是显着参与子实体形成的基因。 。另一方面，在创建敲除系时，我们开始破坏非同源末端连接基因，从而降低基因靶向效率。使用原生质体-PEG 方法将用于破坏非同源末端连接基因 Fv.LigIV 的构建体引入单核蘑菇品系中。转化后，分离出现在含有潮霉素的选择性培养基上的菌落。对于获得的Fv.LigIV破坏候选系，从UV照射的菌丝体中提取RNA，并通过RT-PCR确认Fv.LigIV的表达。结果，在初级筛选中获得的904个品系之一中，在基因组水平上确认了Fv.LigIV的破坏，并且通过RT-PCR确认了Fv.LigIV表达的敲除。

项目成果

期刊论文数量（2）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
エノキタケ(Flammulina velutipes)の子実体形成不全株の低温下における子実体形成関連遺伝子の発現
子实体形成缺陷金针菇低温子实体形成相关基因的表达
  • DOI：
  • 发表时间：
    2021
  • 期刊：
  • 影响因子：
    0
  • 作者：
    平山文華・清水宏幸・山口真弥・種坂英次
  • 通讯作者：
    平山文華・清水宏幸・山口真弥・種坂英次
エノキタケ(Flammulina velutipes)の子実体形成不全株の低温下における子実体形成関連遺伝子の発現
子实体形成缺陷金针菇低温子实体形成相关基因的表达
  • DOI：
  • 发表时间：
    2021
  • 期刊：
  • 影响因子：
    0
  • 作者：
    平山文華・清水宏幸・山口真弥・種坂英次
  • 通讯作者：
    平山文華・清水宏幸・山口真弥・種坂英次
エノキタケ非相同末端結合遺伝子Fv.LigIVの破壊
金针菇非同源末端连接基因 Fv.LigIV 的破坏
  • DOI：
  • 发表时间：
    2023
  • 期刊：
  • 影响因子：
    0
  • 作者：
    藤野優輝・辻健也・築山拓司・種坂英次
  • 通讯作者：
    藤野優輝・辻健也・築山拓司・種坂英次
エノキタケ非相同末端結合遺伝子Fv.LigIVの破壊
金针菇非同源末端连接基因 Fv.LigIV 的破坏
  • DOI：
  • 发表时间：
    2023
  • 期刊：
  • 影响因子：
    0
  • 作者：
    藤野優輝・辻健也・築山拓司・種坂英次
  • 通讯作者：
    藤野優輝・辻健也・築山拓司・種坂英次
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種坂 英次其他文献

Survey of Environmental Radiation in Kawamata-machi, Fukushima-ken(2)radioactive cesium in wild mushroom
福岛县川又町环境辐射调查(2)野生蘑菇中的放射性铯
  • DOI：
  • 发表时间：
    2012
  • 期刊：
  • 影响因子：
    0
  • 作者：
    稲垣 昌代;山西 弘城;若林 源一郎;芳原 新也;伊藤 哲夫;白坂 憲章;種坂 英次;奥村 博司;古川 道郎
  • 通讯作者：
    古川 道郎
RAPDマーカーを用いたエノキタケの着色因子を含む連鎖解析
使用 RAPD 标记进行连锁分析，包括金针菇的着色因素
  • DOI：
  • 发表时间：
    2006
  • 期刊：
  • 影响因子：
    0
  • 作者：
    種坂 英次; ら
  • 通讯作者：
    ら

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