探索的薬物動態研究に資する高い薬物代謝機能を発現したヒト代替肝細胞の培養系構築

构建具有高药物代谢功能的人替代肝细胞培养体系，有助于探索性药代动力学研究

• 批准号: 20K07161
• 负责人: 山田 泰弘
• 金额: $ 2万
• 依托单位: Nihon Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K07161/
• 关键词: ヒト代替肝細胞; ヒト肝癌由来細胞; DNAメチル基転移酵素阻害剤; HepG2細胞; Huh-7細胞; シトクロムP450; グルクロン酸転移酵素; 硫酸転移酵素; エピゲノム処理; 薬物代謝酵素; 薬物代謝酵素機能; 薬物動態試験; エピゲノム化処理; リプログラミング

創薬研究での薬物動態と毒性評価に資するヒト代替肝細胞（ヒト肝細胞様細胞）を創製するために、ヒト肝芽腫由来細胞株のHuh-7細胞またはヒト肝癌由来細胞株のHepG2細胞をDNAメチル基転移酵素（DMNT）害剤である5-アザシチジン（5-Aza）でエピゲノム化処理することにより、第I相反応酵素である7種類のシトクロムP450（CYP1A2, 2B6, 2C8, 2C9,2C19, 2D6, 3A）分子種および第II相反応酵素であるグルクロン酸転移酵素（UGT）と硫酸転移酵素（SULT）活性を高発現させるための最適培養条件について検討中し、明らかにした。今年度は以下の4項目について検討した。① 5-Aza処理の最適濃度は、HepG2細胞では2.5 μMであり、Huh-7細胞では10 μMであったが、処理後の薬物代謝酵素活性の発現誘導効果を両細胞間で比較すると、Huh-7細胞の方が明らかに低く、またHepG2細胞で認められたCYP2B6とCYP2C8の発現誘導が全く認められなかった。② HepG2細胞の5-Aza暴露処理中のDMEM培地中グルコース濃度について検討したところ、高グルコース濃度よりも低グルコース濃度の培地の方がより高い薬物代謝酵素活性の発現が認められた。③ HepG2細胞の5-Aza暴露処理中のDMEM培地へのDMSO添加の効果を検討したところ、CYP3AとUGT酵素活性においてより高い発現が認められたが、他の薬物代謝酵素活性は低下する傾向が認められた。④ 5-aza処理HepG2細胞の薬物代謝酵素機能を維持するための培養培地について、従来のDMEMと市販の3種類のヒト肝細胞培養培地で比較検討したところ、各培地において各薬物代謝酵素ごとに活性の維持能力に多少の違いはあったが、コストパフォーマンスと全ての薬物代謝酵素活性を考慮すると、DMEM培地での培養が推奨される。

为了创建人类替代性肝细胞（人肝细胞状细胞），在药物发现研究中有助于药代动力学和毒性评估，这是高度表达七种细胞色素p450的最佳培养条件研究了II期反应性酶，葡萄糖醛酸转移酶（UGT）和硫酸盐转移酶（SULT），并研究了高表达II期反应性酶的最佳培养条件。今年，我们讨论了以下四个项目：1）在HEPG2细胞中，5-AZA治疗的最佳浓度为2.5μM，HUH-7细胞中的最佳浓度为10μM，但是当比较诱导药物代谢酶表达的影响时，两种细胞之间的治疗后，HuH-7细胞之间的治疗后，HUH-7细胞显然降低了CYP2B6和CYP2B6和CYP22的表达。 2）当在5-ZA暴露期间检查HEPG2细胞中DMEM培养基中的葡萄糖浓度时，葡萄糖浓度较低的培养基显示，与高葡萄糖浓度相比，葡萄糖浓度低的培养基表现出更高的药物代谢酶活性。 ③当检查在HEPG2细胞中将DMSO添加到DME培养基的效果时，在CYP3A和UGT酶活性中观察到了更高的表达，但是其他药物 - 代谢酶活性也有降低的趋势。 ④在比较和检查培养基以维持5-aza处理的HEPG2细胞中药物代谢酶功能的功能时，具有三种类型的人类肝细胞介质培养基，包括常规DMEM和商业上可用的培养基，在每种培养基中，在每种培养基中的活性及其培养的能力都存在一些差异，但在每种培养基中维持培养基的活性，并考虑各种成本的成本，并且所有培训均具有不同建议。