口腔扁平上皮癌の間質浸潤と側方上皮内進展：その相反的制御と分子基盤

口腔鳞状细胞癌的间质侵犯和侧上皮内扩展：它们的相互调节和分子基础

基本信息

批准号：
21K09841
负责人：
阿部達也
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09841/
关键词：
口腔扁平上皮癌 ladinin-1 RNA-seq transcriptome 解析 WNT EMT 平面細胞極性間質浸潤

项目摘要

口腔扁平上皮癌培養細胞株 HSC-4 において LAD1 の発現抑制下での WNT5A の発現変動がみられたことから, LAD1と WNT pathway の関連性を検討することとした. pathway 関連遺伝子候補として, WNT5A とともに発現増加のみられた ROR2 遺伝子の siRNA 法での発現抑制を, 複数の市販 siRNA 試薬を用いて検討したが, 十分な発現抑制効率は得られなかった. 現在, ROR2 発現抑制のための代替方法とともに, WNT5A 中和抗体等を用いた WNT pathway の阻害を検討中である.また, WNT pathway 以外の signalling pathway が関連している可能性も考慮して, HSC-4 における LAD1 発現抑制細胞について, 非抑制細胞を対照サンプルとして, 次世代シーケンサーによる RNA-seq を用いた transcriptome 解析を行った. その結果, LAD1 発現抑制細胞で発現増加を認める遺伝子群は, gene ontology 解析において, 細胞接着性, 細胞分化に関わる可能性が見出された. また, 発現変動を示す遺伝子の一部のクラスターでは, 細胞遊走に関する遺伝子の enrich が認められたことから, LAD1 の発現変動が細胞遊走に関与し, その背景に WNT pathway が関連しうるという仮説を支持する所見が, transcriptome レベルでも得られた結果であった. これらの発現変動を示した遺伝子群やその制御に関わる転写因子について, 今後さらに詳細な検討を進める予定である。

由于在LAD1抑制下，在口服鳞状细胞癌培养细胞系HSC-4中观察到Wnt5a的表达，因此我们决定研究LAD1和Wnt途径之间的关系。我们使用使用siRNA方法研究了与途径相关的基因增加的ROR2基因的siRNA表达，该基因使用siRNA方法研究了仅用Wnt5a表达的ROR2基因表达的抑制，但未获得足够的表达抑制效率。目前，我们目前正在研究使用中和抗体的抑制Wnt途径，以及一种抑制ROR2表达的替代方法。此外，考虑到Wnt途径以外的信号通路相关的可能性，HSC-4中的LAD1被考虑。对于表达抑制的细胞，使用未抑制的细胞作为对照样品，使用Next Generation Sequencer使用RNA-Seq进行转录组分析。结果，发现在LAD1表达细胞中表现出更多表达的基因在基因本体分析中与细胞粘附和细胞分化有关。此外，由于在表现出表达波动的一些基因簇中观察到了与细胞迁移相关的基因的富集，因此在转录组水平上也获得了结果，这支持LAD1的表达波动与细胞迁移有关，并且Wnt途径与此背景有关。我们计划进一步研究表现出这些表达波动和调节涉及的转录因子的基因组。