SARS-CoV2偽型レンチウィルスによる鼻腔感染阻害薬のスクリーニング

SARS-CoV2假型慢病毒鼻腔感染抑制剂的筛选

• 批准号: 21K09617
• 负责人: 大江 洋子
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09617/
• 关键词: SARS-Cov2; レンチウィルス; ギャップ結合複合体; 薬剤選抜法; 新型コロナウイルスSARS-CoV2; 鼻腔感染阻害薬; レンチウイルス

COVID19の初期症状に見られるように、経鼻感染が特徴的なウィルス感染症への治療法開発では鼻粘膜上皮細胞や鼻粘膜組織を用いたin vitro感染阻止能の評価実験が有効となる。本研究ではBSL2の範囲内で治療薬開発ができるレンチウィルスにSARS-Cov2等のウィルスの単一スパイクタンパク質（S-protein等）のみをエンベロープに置換することにより、BSL2レベルのin vitro感染実験で新興再興感染症の感染を阻止する治療薬を開発することを目的とする。これまで武漢型（Lenti-Cov2-S-GFP）とベンベロープSタンパク質にD614G変異を持つ欧州型（Lenti-Cov2-S-D614G-GFP）を作成した。SARS-Cov2偽型レンチウイルスは緑色蛍光タンパク質を発現し、SARS-Cov2の疑似エンベロープとしてSARS-Cov2 S-Protein（武漢型とD614G変異を持つ欧州型）を有する、対象群として通常用いられるVSVGをエンベロープに持つレンチウィルス（Lenti-VSVG）を用い一般的なレンチウィルスへの感染との相違を求めることによりCOVID19特有の感染阻害効果を示す薬剤を選抜した。これまでの研究では、あるペプチド分子の存在の有無下でのヒト上皮細胞におけるLenti-CoV2-S-GFPの感染についての評価を行った。ヒト上皮細胞をSARS-CoV-2-S疑型GFPレンチウイルス（Lenti-CoV2-S-GFP）に感染させ（MOI＝100）、コントロール、該当ペプチドの分子種（各10 μg/mL）で24h刺激した。その結果、同細胞へのレンチウイルスの感染を確認した。対照的に他の分子種3種では効果を見られなかった。この結果から、同ペプチド分子種がSARS-CoV-2による感染を抑制する可能性が示唆された。

如Covid19的早期症状所示，在开发一种以鼻感染为特征的病毒感染的治疗方法中，使用鼻粘膜上皮细胞和鼻粘膜组织评估体外感染能力的实验将有效。这项研究旨在开发一种治疗剂，该治疗剂通过仅替换诸如SARS-COV2的病毒（例如SARS-COV2）在BSL2水平的体外感染实验中感染新的和重新出现的感染性疾病，例如SARS-COV2，例如在Lenentivirus中使用蜂巢病毒的信封，可以在BSL2范围内开发。到目前为止，我们已经在Wuhan类型（Lenti-Cov2-S-GFP）和Benbellope S蛋白质中创建了具有D614G突变的欧洲类型（Lenti-Cov2-S-D614G-GFP）。 SARS-COV2假病毒假病毒表达绿色的荧光蛋白，并使用SARS-COV2 S蛋白（一种具有Wuhan类型和D614G突变的欧洲类型）作为SARS-COV2的伪含量，并且是慢病毒（lenti-i-vsvg）的伪造，并确定了一个差异，以确定一个差异。选择具有感染抑制作用的药物。先前的研究已经评估了在有或没有肽分子的情况下，在人类上皮细胞中的Lenti-COV2-S-GFP感染。人类上皮细胞被SARS-COV-2-S样GFP慢病毒（Lenti-COV2-S-GFP）感染（MOI = 100），并用相关肽的对照和分子种（每个10μg/mL）刺激24小时。结果，确认慢病毒感染发生在同一细胞中。相反，其他三个分子物种没有作用。这些结果表明，肽分子物种可能抑制SARS-COV-2的感染。

项目成果

Generation of two iPSC lines from siblings of a homozygous patient with hearing loss and a heterozygous carrier with normal hearing carrying p.G45E/Y136X mutation in GJB2

从患有听力损失的纯合子患者和携带 GJB2 p.G45E/Y136X 突变的听力正常的杂合子携带者的兄弟姐妹中生成两个 iPSC 系

• DOI: 10.1016/j.scr.2021.102290
• 发表时间: 2021
• 期刊: Stem Cell Research
• 影响因子: 1.2
• 作者: Fukunaga Ichiro;Oe Yoko;Danzaki Keiko;Ohta Sayaka;Chen Cheng;Iizumi Madoka;Shiga Takahiro;Matsuoka Rina;Anzai Takashi;Hibiya-Motegi Remi;Tajima Shori;Ikeda Katsuhisa;Akamatsu Wado;Kamiya Kazusaku
• 通讯作者: Kamiya Kazusaku

Modeling Gap junction beta 2 gene-related deafness with human iPS

使用人类 iPS 模拟间隙连接 beta 2 基因相关性耳聋

• DOI: 10.1093/hmg/ddab097
• 发表时间: 2021
• 期刊: Human Molecular Genetics
• 影响因子: 3.5
• 作者: Ichiro Fukunaga;Yoko Oe;Keiko Danzaki;Sayaka Ohta;Cheng Chen;Kyoko Shirai;Atsushi Kawano;Katsuhisa Ikeda;Kazusaku Kamiya
• 通讯作者: Kazusaku Kamiya