胸腺移植を用いた細胞性免疫機能改変による老人性難聴予防とヒトへの応用

通过胸腺移植改变细胞介导的免疫功能预防老年性耳聋及其在人类中的应用

基本信息

批准号：
21K09593
负责人：
杉田侑己
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kansai Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

報告者らは以前、老化促進モデルマウスであるSAMP1を用いて、胎児胸腺の腎被膜下移植や同系若齢マウスの凍結保存リンパ球接種により難聴の進行が予防されることを明らかにしている。2022年度は科研費2年目にあたる。2021年度にホストとなるC57BL/6マウスを購入し、6群：C57/BL6マウスにおいて若齢（2か月齢）マウス群、無処置群、コントロール（生食接種、SHAM手術）群、eGFP胎児マウスの胸腺を移植する群、若齢eGFPマウスのリンパ球を接種する群、eGFPマウスにおいて無処置群を作製した。若齢eGFPマウスリンパ球を予め凍結保存しておき、4か月齢から1.5か月ごとに計5回リンパ球接種群に接種を行った。胸腺移植群には4か月齢、8か月齢において腎被膜下に移植を行った。12か月齢（若齢群は2か月齢）においてABR、Tリンパ球機能検査、リンパ球フローサイトメトリー、血清採取、蝸牛採取、胎児胸腺が移植された腎臓採取、脳採取、肝臓採取などを行った。2022年度には、それぞれにおいて各種アッセイ（Nitric Oxide測定、胸腺移植群での腎被膜下移植片の病理学的生着確認、蝸牛のHE染色や免疫染色による組織学的検討、リアルタイムPCRによる蝸牛や各臓器のアポトーシスや炎症の遺伝子測定）を行った。C57BL/6マウスにおいても難聴の進行が有意に予防されていた。しかし、血清Nitric Oxideなど有意差を認めないものもあった。血清中の酸化ストレスの上昇はないものの、加齢による難聴の進行があり、処置により進行予防を認めている。何が原因となっているのかいまだ明らかとなっていないことも多い。機序を明らかにするため、より上流である骨髄細胞を用いて検討していく予定である。

作者之前使用加速衰老模型小鼠 SAMP1 证明，通过将胎儿胸腺移植到肾囊下并接种来自同系幼鼠的冷冻保存的淋巴细胞，可以阻止听力损失的进展。 2022 财年将是 KAKENHI 的第二年。 2021年，我们购买了C57BL/6小鼠作为宿主，建立了6组C57/BL6小鼠：幼龄（2月龄）小鼠组、未治疗组、对照组（生理盐水接种、SHAM手术）组，制作了胸腺移植组、接种了幼年eGFP小鼠淋巴细胞的组、以及未处理的eGFP小鼠组。预先冻存幼年eGFP小鼠淋巴细胞，从4月龄开始接种到淋巴细胞接种组，每1.5个月共接种5次。胸腺移植组在4月龄和8月龄时进行肾被膜下移植。 12月龄（幼龄组2月龄）进行ABR、T淋巴细胞功能检测、淋巴细胞流式细胞仪、血清采集、耳蜗采集、胎儿胸腺移植肾采集、脑采集、肝脏采集等塔。 2022年，进行了各种测定（一氧化氮测定、胸腺移植组肾被膜下移植物存活的病理学确认、耳蜗HE染色和免疫染色的组织学检查、耳蜗的实时PCR分析和细胞凋亡的遗传测定）并对各器官进行炎症检查。 C57BL/6 小鼠的听力损失进展也得到显着预防。然而，在某些情况下，例如血清一氧化氮，没有观察到显着差异。尽管血清氧化应激没有增加，但与年龄相关的听力损失正在进展，治疗已被证明可以防止进展。在许多情况下，目前还不清楚是什么原因造成这种情况。为了阐明其机制，我们计划使用更上游的骨髓细胞进行研究。