グルタチオン合成経路に着目した薬剤耐性卵巣癌に対する新規治療戦略の確立

以谷胱甘肽合成途径为重点的耐药性卵巢癌新治疗策略的建立

• 批准号: 21K09440
• 负责人: 清野 学
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Yamagata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09440/
• 关键词: グルタチオン; 卵巣明細胞癌; パクリタキセル; フェロトーシス; 卵巣癌; 明細胞癌; スルファサラジン; 治療抵抗性; 活性酸素種

【研究方法】明細胞癌細胞株 (TOV21G, RMG-1, HAC-2, ES-2)を用い、それぞれの細胞株にpaclitaxelとスルファサラジン（SAS）の単剤またはpaclitaxelとSASを併用投与し、１) 細胞増殖能についてMTSアッセイで検討、２）ROS産生をフローサイトメトリーで検討、３）apoptosis誘導をウェスタンブロットで検討した。４)ferroptosis阻害剤（ferrostatin-1）を用いて細胞増殖能に対する影響をMTSアッセイで検討した。５）GSH代謝経路関連蛋白の発現をウェスタンブロットで検討した。６）paclitaxelとSAS併用による抗腫瘍効果をRMG-1の異種移植モデルで検討した。【結果】HAC-2を除いたすべての明細胞癌細胞株でpaclitaxelとSASの併用投与はそれぞれの単剤投与と比較して１)細胞増殖能を抑制し、２）ROSの産生が増加し、３）apoptosis誘導を増強した。４）ES-2のみpaclitaxelとSASの併用投与による細胞増殖抑制効果がferrostatin-1で解除された。５）HAC-2では他の細胞株に比較してシスタチオニンガンマリアーゼ（CGL）発現が上昇しており、ES-2では他の細胞株に比較してグルタチオンペルオキシダーゼ（GPx4）の発現が低下していた。６）paclitaxelとSASの併用投与によってそれぞれの単剤投与と比較して抗腫瘍効果の増強を認めた。【結論】明細胞癌細胞株ではCGLが高発現であるとSASの細胞死誘導効果が低下する。SASとpaclitaxelの併用投与で誘導される細胞死の主たる機序はapoptosisであるが、GPx4が低下しているとferroptosisも誘導されることが明らかとなった。

[研究方法] 使用透明细胞癌细胞系(TOV21G、RMG-1、HAC-2、ES-2)，对各细胞系单独施用紫杉醇和柳氮磺吡啶(SAS)或与紫杉醇和SAS联合施用。 1)细胞增殖。通过MTS测定检查能力，2)通过流式细胞术检查ROS产生，3)通过蛋白质印迹检查细胞凋亡诱导。 4)使用铁死亡抑制剂(ferrostatin-1)，通过MTS实验检查对细胞增殖能力的影响。 5)Western blotting检测GSH代谢途径相关蛋白的表达。 6)在RMG-1异种移植模型中研究了紫杉醇和SAS联合的抗肿瘤作用。 [结果] 在除 HAC-2 之外的所有透明细胞癌细胞系中，与单独施用紫杉醇和 SAS 相比，联合施用紫杉醇和 SAS 1) 抑制细胞增殖能力，2) 增加 ROS 产生，3) 增强细胞凋亡诱导。 4)仅在ES-2中，紫杉醇和SAS联合给药引起的细胞增殖抑制作用被ferrostatin-1抵消。 5)与其他细胞系相比，HAC-2中的胱硫醚γ裂解酶(CGL)表达增加，与其他细胞系Ta相比，ES-2中谷胱甘肽过氧化物酶(GPx4)的表达减少。 6)与单独使用紫杉醇和SAS相比，联合使用紫杉醇和SAS增强了抗肿瘤效果。 [结论]透明细胞癌细胞系中CGL的高表达降低了SAS的细胞死亡诱导作用。 SAS和紫杉醇联合给药诱导细胞死亡的主要机制是细胞凋亡，但研究表明当GPx4减少时也会诱导铁死亡。

项目成果

グルタチオン代謝経路阻害剤とpaclitaxelの併用による 細胞死誘導機構に関する検討

谷胱甘肽代谢途径抑制剂与紫杉醇联合诱导细胞死亡机制研究

• 发表时间: 2022
• 作者: 出井麗;太田剛;伊藤泰史;堀川翔太 榊宏諭;清野学;永瀬智
• 通讯作者: 永瀬智