Vaccine therapy targeting KRAS mutation for pancreatic cancer

针对胰腺癌 KRAS 突变的疫苗治疗

基本信息

批准号：
21J15685
负责人：
松本慎平
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-28 至 2023-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21J15685/
关键词：
膵がん KRAS がんワクチン療法抗体抗KRAS抗体

项目摘要

当初、膵がんにおける変異KRASをターゲットとしたワクチン療法の開発を目的として研究を進めた。疾患モデルマウスとしては腫瘍皮下移植モデル（遺伝子改変膵がんモデルマウスから樹立したcell lineを移植）、遺伝子改変モデル（Ptf1a-CreERT2;LSL-KrasG12D;p53flox/flox;Rosa26-tdTomato）を用いた。ワクチン形態としてはペプチド、プラスミド、リコンビナントタンパクを用い、投与方法としては皮下/筋肉注射による全身投与、免疫組織内注射（脾内注射）を施行した。しかしいずれの抗原・投与法においても有意な抗腫瘍効果を認めなかった。ワクチン療法の開発を断念し膵癌に対する抗体療法の開発に方針変更した。ワクチン療法の研究の中で、KRAS G12Dタンパクワクチン群における腫瘍増大速度の二極化傾向から、抗KRAS抗体によるADE; antibody-dependent enhancementの可能性を考慮し、抗KRAS G12D抗体の抗腫瘍効果を評価することとした。KRAS G12Dタンパクを免疫したマウスの腸骨リンパ節からハイブリドーマを作製し、約500のうち1クローンのみでKRAS G12Dタンパク特異的な抗体の産生を認めた。この抗体のサブクラスがIgMであったため、CRISPR-Cas9システムを用いてクラススイッチさせ、抗KRAS G12DモノクローナルIgGを分泌するハイブリドーマを作製した。in vitroの評価として、細胞蛍光免染で同抗体はKRAS G12Dを強制発現させたHEK293に対して、HEK293 wild typeと比較してより強い染色を示した。今後in vivoでの腫瘍集積を示せれば、同抗体に抗腫瘍薬剤を結合させたADC;antibody-drug conjugateを作製することで治療薬として応用できる可能性がある。

最初，该研究旨在开发一种针对胰腺癌突变 KRAS 的疫苗疗法。作为疾病模型小鼠，使用肿瘤皮下移植模型（移植了从转基因胰腺癌模型小鼠建立的细胞系）和转基因模型（Ptf1a-CreERT2；LSL-KrasG12D；p53flox/flox；Rosa26-tdTomato）。所用疫苗为肽类、质粒类、重组蛋白类，给药方式包括全身皮下/肌内注射和免疫系统注射（脾内注射）。然而，任何抗原或施用方法均未观察到显着的抗肿瘤作用。我们放弃了疫苗疗法的开发，转而开发胰腺癌抗体疗法。在疫苗治疗研究中，考虑到KRAS G12D蛋白疫苗组肿瘤生长速度的两极分化，我们考虑了抗KRAS抗体引起的ADE依赖性增强的可能性，并研究了抗KRAS G12D抗体的抗肿瘤作用。我决定评估一下。杂交瘤是从用 KRAS G12D 蛋白免疫的小鼠的髂淋巴结中产生的，大约 500 个克隆中只有 1 个克隆产生了 KRAS G12D 蛋白特异性抗体。由于该抗体的亚类是 IgM，因此使用 CRISPR-Cas9 系统进行类别转换，以创建分泌抗 KRAS G12D 单克隆 IgG 的杂交瘤。作为体外评价，在细胞荧光免疫染色中，与HEK293野生型相比，相同的抗体对强制表达KRAS G12D的HEK293显示出更强的染色。如果将来能够证明肿瘤在体内的积累，那么就有可能创建一种ADC（抗体-药物缀合物），其中相同的抗体与抗肿瘤药物结合，并将其用作治疗药物。