幹細胞表面特異的糖鎖を標的とした膵癌の新規治療法の開発

开发针对干细胞表面特异性糖链的胰腺癌新治疗方法

• 批准号: 21K08764
• 负责人: 五味 不二也
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Geriatric Hospital and Institute of Gerontology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08764/
• 关键词: 膵癌細胞; nestin; 表面糖鎖; 発現細胞; geneticin; 多様性; 癌幹細胞

凍結保存していた、nestinを強制発現させたMIAPaCa-2とPK-8細胞を解凍した後、1~2継代し、RT-PCR法によりnestinの発現を再確認した。MIAPaCa-2およびPK-8のnestin強制発現細胞はmock細胞に対して、nestin mRNAがともに約2.5倍程度高かった。これらの細胞を用いて細胞表面の糖鎖解析を行なった。凍結サンプルから疎水性画分を抽出して膜成分とし、レクチンマイクロアレイを行ない、Glycostation Readerにより解析した。Nestin強制発現により、MIAPaCa-2細胞ではDSAに反応する（GLｃNAcbeta1-4)nが減少し、分枝構造が減っていると考えられた。PK-8細胞ではHHLに反応する高マンノース鎖が減少していた。Nestin強制発現によって2種類の細胞に共通する糖鎖構造の変化は見られなかった。理由としては細胞質に発現するnestinが細胞表面の糖鎖の変化を引き起こし難いことや、強制発現したnestinの発現量が少ないことが考えられた。一方で、細胞間では表面糖鎖の特徴は大きく異なっており、それぞれの細胞の特徴を示していることが考えられた。

用强迫表达巢蛋白的冷冻保存的Miapaca-2和PK-8细胞解冻后，将它们传递了1-2，并通过RT-PCR重新确认了Nestin的表达。 Miapaca-2和PK-8的Nestin强迫表达显示出巢蛋白mRNA的mRNA，均比模拟细胞高约2.5倍。这些细胞用于分析细胞表面上的聚糖。从冷冻样品中提取疏水分数以形成膜成分，进行凝集素微阵列，并使用糖固化读取器进行分析。人们认为Nestin的强制表达可降低Miapaca-2细胞中N型DSA反应性（Glcnacbeta1-4）N，并减少分支结构。在PK-8细胞中，响应于HHL的高甘露糖链减少了。由于巢蛋白表达强迫，观察到两种类型细胞的聚糖结构的变化。原因是在细胞质中表达的Nestin不太可能导致细胞表面的聚糖变化，并且强制表达的Nestin的量很小。另一方面，表面糖链的特征在细胞之间差异很大，并且人们认为它们表现出每个细胞的特征。