Studies on the regulatory mechanisms by novel bioactive peptide and receptor systems

新型生物活性肽及受体系统调控机制研究

基本信息

批准号：
21K08543
负责人：
森健二
金额：
$ 2.66万
依托单位：
National Cardiovascular Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

ペプチドホルモンや神経ペプチドに代表される生理活性ペプチドは、細胞間の情報伝達を担う主要な分子の１つであり、内分泌的調節だけでなく摂食、飲水、性行動及び睡眠覚醒などの本能行動や、生体の恒常性を維持するための自律機能を調節するなど、生体の制御及び恒常性維持において重要な役割を果たしている。このため、未だ知られていない生体制御機構を明らかにするために、新しい生理活性ペプチドの探索や発見できた生理活性ペプチドの機能解析研究が現在でも盛んに実施されている。これまでに、リガンドが不明なオーファンGPCRをCHO細胞やHEK293細胞で発現させて、そのアゴニスト活性を組織抽出物から見出すことにより、新たな生理活性ペプチドを同定した。その過程において、ラット心房から抽出したペプチド画分にHEK293細胞でのcAMP産生を誘導する活性が含まれることを見出している。このcAMP産生誘導活性のゲルろ過クロマトグラフィーにおける分子量や陽イオン交換クロマトグラフィーにおける保持時間を検討したところ、既知の生理活性ペプチドとは異なる物性を持つことが明らかになり、未知の生理活性ペプチドの存在が示唆された。そこで、高速液体クロマトグラフィーを駆使した複数回の精製によりこの活性を有するペプチドを精製したが、純度や収量の低さが原因となり構造決定には至らなかった。しかしながら、ラット心室にも同様の活性が認められたため、精製と構造解析を実施した。また、これまでに新しい生理活性ペプチドとしてNMU precursor-related peptide（NURP）を同定し、興味深い生物活性を有することを示してきた。このNURPについて、その受容体探索を進めた。

以肽激素和神经肽为代表的生理活性肽是负责细胞间信息传递的主要分子之一，不仅参与内分泌调节，还参与饮食、性行为、睡眠/觉醒等本能行为它在生物体的控制和体内平衡中发挥着重要作用，例如调节自主神经功能以维持体内平衡。因此，为了阐明迄今未知的生物控制机制，寻找新的生理活性肽以及对所发现的生理活性肽的功能分析的研究仍在积极地进行。迄今为止，我们通过在 CHO 细胞和 HEK293 细胞中表达具有未知配体的孤儿 GPCR，并在组织提取物中发现其激动剂活性，鉴定出了新的生物活性肽。在此过程中，我们发现从大鼠心房提取的肽组分含有诱导 HEK293 细胞产生 cAMP 的活性。当我们检查这种cAMP产生诱导活性在凝胶过滤色谱中的分子量和在阳离子交换色谱中的保留时间时，很明显它具有与已知生物活性肽不同的物理性质，表明未知生物活性肽的存在。被建议。因此，通过高效液相色谱多次纯化，纯化出具有该活性的肽，但由于纯度低、收率低而无法确定其结构。然而，在大鼠心室中观察到类似的活性，因此进行了纯化和结构分析。此外，我们之前已将NMU前体相关肽（NURP）鉴定为一种新的生理活性肽，并表明其具有有趣的生物活性。我们继续寻找该 NURP 的受体。