再発性C. difficile感染症に対する新規創薬シード化合物の探索

寻找治疗复发性艰难梭菌感染的新药种子化合物

基本信息

批准号：
21K08514
负责人：
松井秀仁
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08514/
关键词：
C. difficile 毒素芽胞 Binary toxin 天然化合物 Clostridioides difficile CDI 再発性嫌気性菌

项目摘要

Clostridioides difficileは、芽胞形成性を有する嫌気性グラム陽性桿菌である。本菌は、抗菌薬関連下痢症の原因菌として、強毒株の流行から世界的に問題となっている。本研究では、C. difficile感染症で問題となる再発例の抑制につなげることができるような新たな作用を有した天然化合物の探索を目的としている。今年度は、Binary toxinを構成するCDTbの組み換えタンパクを精製し、免疫したラットの抗血清より抗CDTbポリクローナル抗体を得ることが出来た。本抗体をビオチン標識化して構築したsandwich-ELISA系を用いることで、C. difficile培養上清中のCDTbを定量可能であることを確認した。次に、Binary toxin産生C. difficileを用いて、抗菌活性と芽胞形成阻害活性、毒素産生阻害活性を評価可能なスクリーニング系を構築した。毒素産生量については、これまでに構築したCDTaとCDTb、Toxin BのELISA系を用いて変動を定量的に評価した。本スクリーニング系を用いて、天然化合物ライブラリーより活性化合物の1次スクリーニングを行った結果、抗菌活性を有する化合物、芽胞形成阻害活性を有する化合物、毒素産生阻害活性を有する化合物を、それぞれ142、35、7化合物見出すことが出来た。さらに高活性の化合物の絞り込みを進めるとともに、詳細な阻害活性について解析を進めている。

艰难梭菌是一种具有孢子形成特性的厌氧革兰氏阳性杆菌。这种细菌是抗生素相关性腹泻的病原体，并且由于高毒力菌株的流行而成为一个世界性问题。这项研究的目的是寻找具有新作用的天然化合物，可以预防艰难梭菌感染的复发。今年，我们纯化了构成二元毒素的重组CDTb蛋白，并能够从免疫大鼠的抗血清中获得抗CDTb多克隆抗体。我们证实，可以使用通过生物素标记该抗体构建的夹心ELISA系统来定量艰难梭菌培养上清液中的CDTb。接下来，我们构建了一个筛选系统，可以使用产二元毒素的艰难梭菌评估抗菌活性、孢子形成抑制活性和毒素产生抑制活性。关于产生的毒素量，我们使用先前构建的 CDTa、CDTb 和毒素 B 的 ELISA 系统定量评估了波动。使用该筛选系统对天然化合物库中的活性化合物进行初步筛选，结果分别鉴定了 142 种和 35 种具有抗菌活性、孢子形成抑制活性和毒素产生抑制活性的化合物，其中发现了 7 种化合物。除了进一步缩小高活性化合物的范围外，我们还在对其抑制活性进行详细分析。