再発性C. difficile感染症に対する新規創薬シード化合物の探索

寻找治疗复发性艰难梭菌感染的新药种子化合物

基本信息

批准号：
21K08514
负责人：
松井秀仁
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08514/
关键词：
C. difficile 毒素芽胞 Binary toxin 天然化合物 Clostridioides difficile CDI 再発性嫌気性菌

项目摘要

Clostridioides difficileは、芽胞形成性を有する嫌気性グラム陽性桿菌である。本菌は、抗菌薬関連下痢症の原因菌として、強毒株の流行から世界的に問題となっている。本研究では、C. difficile感染症で問題となる再発例の抑制につなげることができるような新たな作用を有した天然化合物の探索を目的としている。今年度は、Binary toxinを構成するCDTbの組み換えタンパクを精製し、免疫したラットの抗血清より抗CDTbポリクローナル抗体を得ることが出来た。本抗体をビオチン標識化して構築したsandwich-ELISA系を用いることで、C. difficile培養上清中のCDTbを定量可能であることを確認した。次に、Binary toxin産生C. difficileを用いて、抗菌活性と芽胞形成阻害活性、毒素産生阻害活性を評価可能なスクリーニング系を構築した。毒素産生量については、これまでに構築したCDTaとCDTb、Toxin BのELISA系を用いて変動を定量的に評価した。本スクリーニング系を用いて、天然化合物ライブラリーより活性化合物の1次スクリーニングを行った結果、抗菌活性を有する化合物、芽胞形成阻害活性を有する化合物、毒素産生阻害活性を有する化合物を、それぞれ142、35、7化合物見出すことが出来た。さらに高活性の化合物の絞り込みを進めるとともに、詳細な阻害活性について解析を進めている。

梭状芽胞杆菌是一种具有孢子源性的厌氧革兰氏阳性杆菌。由于有毒菌株的流行作为导致抗生素相关的腹泻的病因，因此该细菌已成为一个全球问题。这项研究旨在寻找具有新作用的自然化合物，这些化合物可能导致艰难梭菌感染有问题的复发病例。今年，纯化了构成二进制毒素的CDTB的重组蛋白，并从免疫大鼠的抗血清中获得抗CDTB多克隆抗体。通过使用由生物素标记该抗体构建的三明治 - elisa系统，可以证实艰难梭菌培养上清液中的CDTB可以定量。接下来，使用二进制毒素产生构建了能够评估抗菌活性，孢子抑制活性和毒素产生抑制活性的筛查系统。使用CDTA，CDTB和毒素B的ELISA系统对毒素产生的量进行定量评估，这些毒素量到达现在。使用此筛选系统，首先从天然化合物库中筛选活性化合物，结果分别发现142、35和7化合物，例如抗菌活性，具有孢子抑制活性的化合物，并具有具有毒素抑制活性的化合物。此外，我们正在缩小高度活性化合物，并分析详细的抑制活性。