Analysis of mechanism of adipose differentiation around hyperplastic parathyroids

增生性甲状旁腺周围脂肪分化机制分析

基本信息

批准号：
21K08237
负责人：
角田隆俊
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Tokai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08237/
关键词：
二次性副甲状腺機能亢進症脂肪分化

项目摘要

私たちは「副甲状腺細胞の脂肪細胞への分化転換の機序を明らかにし、過形成副甲状腺とその周囲に蓄積する脂肪組織の関係性を解明する」ため、in vitro での分化転換現象の再現を試みたが、現在のところ脂肪細胞分化は検出できていない。これは、実験に耐える副甲状腺細胞の株細胞がなく、初代培養を使わざるを得ないからである。副甲状腺細胞は株化が難しいことで知られており、初代培養も培養下へ移すとすぐに分裂能を消失してしまうため、脂肪細胞への分化転換が進まないと考えられた。そこで本年度は、副甲状腺細胞をiPS化した細胞を再び副甲状腺に分化させ、細胞が分裂能を維持している間に脂肪細胞へ分化させることを試みた。具体的には、ヒト副甲状腺細胞より作製されたiPS細胞を副甲状腺細胞に再分化させる過程で脂肪細胞への分化転換を誘導することとし、本年度はiPS細胞を副甲状腺細胞に分化させる系の確立と改良を行った。ヒト副甲状腺由来のiPS細胞は他研究所で確立したものを譲り受けた。副甲状腺細胞への再分化工程は以下の通りである。iPS細胞から副甲状腺細胞の分化誘導はLawtonらの手法を改良して行った。iPS細胞はまず胚体内胚葉（Definitive Endoderm:DE）に分化させ、それを前方前腸内胚葉（Anterior Forgut Endoderm:AFE）に分化させた。これをさらに咽頭内胚葉（Pharyngeal Endoderm:PE）に分化させた後、最終的に副甲状腺細胞に分化させた。私たちは、AFEの誘導まで既存の肺前駆細胞分化キットを用いることで手間の軽減と期間の短縮を改良した。その後の副甲状腺細胞の再分化は副甲状腺ホルモン（PTH）の産生を指標として確認した。この手法により副甲状腺細胞の再分化を確認できたので、今後、この系を用いて副甲状腺細胞の脂肪分化転換の機序について解析する予定である。

我们试图重新创建体外转分化现象，以“清除甲状旁腺细胞的转变到脂肪细胞的转换机制，并阐明增生甲状旁腺与脂肪组织之间的关系，而脂肪组织围绕它积累”，但在此期间，脂肪细胞差异不大。这是因为没有甲状旁腺细胞系可以承受实验，并且原发性培养被迫使用。已知甲状旁腺细胞很难形成谱系，并且由于将原发性培养物转移到培养物时也很快消失，因此人们认为将转分化为脂肪细胞不会进展。因此，今年，我们试图将再次列入甲状旁腺细胞的细胞分化为甲状旁腺，并分化为脂肪细胞，而细胞保持其分裂的能力。具体而言，将从人甲状旁腺细胞产生的IPS细胞重新分化为甲状旁腺细胞的IPS细胞的过程将诱导转分化为脂肪细胞，今年，我们已经建立并改善了将IPS细胞区分为甲状旁腺细胞的系统。源自人甲状旁腺的IPS细胞是从其他实验室获取的。重新分化过程中甲状旁腺细胞如下。通过改善Lawton等人的方法，从IPS细胞中诱导甲状旁腺细胞。首先将IPS细胞分化为确定的内胚层（DE），然后将其分化为前遗忘的内胚层（AFE）。将其进一步分化为咽内胚层（PE），然后最终分为甲状旁腺细胞。我们通过使用现有的肺祖细胞分化试剂盒，直到诱导诱导，改善了麻烦的减少和时间降低。随后的甲状旁腺激素（PTH）作为指标，证实了甲状旁腺细胞的随后重新分化。由于该技术证实了甲状旁腺细胞的重新分化，因此我们计划使用该系统分析甲状旁腺细胞的脂肪差转分化的机制。