Intracellular signal transduction regulating necroptosis of cardiomyocytes

细胞内信号转导调控心肌细胞坏死性凋亡

• 批准号: 21K08035
• 负责人: 三浦 哲嗣
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08035/
• 关键词: ネクロプトーシス; 細胞死; 細胞内シグナル伝達; 細胞内情報伝達; 心不全; 細胞骨格

１．ネクロプトーシスシグナルによるMLKLの核移行とネクロプトーシスとの関連：心筋症モデルマウスであるデルタサルコグリカン欠損マウスに認められるリン酸化MLKLの核移行の意義を解明のため、H9c2細胞を用いて検討した。その結果、ネクロプトーシスシグナル起動によってリン酸化MLKLは経時的に核にRan/importin 経路を介して移行し、その核移行はRIP1活性依存性であること、MLKLの核外移行シグナルは280-284アミノ酸領域に存在し、この領域の変異によって核内リン酸化MLKLレベルは上昇し、細胞死が増加することを明らかにした。この核内リン酸化MLKLよる細胞死は、RIP1、RIP3のいずれの活性にも依存していなかった。これらの結果より、核内リン酸化MLKLは細胞膜障害を誘導する細胞質リン酸化MLKLとは独立したネクロプトーシス促進機序であることが示唆された。２．ネクロプトーシスシグナル起動による心筋介在版の形態変化と介在版構成蛋白の変化：免疫組織染色用に市販されているデスミン、デスモグレリン-2、カドヘリン、RIP1, RIP3それぞれに対する複数の抗体の特異性を心筋を含めた複数のマウス臓器で検討した。また、抗RIP1, 抗RIP3抗体の特異性については、L929細胞にネクロネクロプトーシスを誘導したサンプルのウェスタンブロットで解析した。検討した16種類の抗体のなかから、特異性に関する問題を確認した11種類を除外し、５種類について組織免疫染色の特異性を解析中である。なお、抗RIP1抗体では正常心筋組織が染色されなかったが、ウェスタンブロットでもRIP1蛋白はほとんど検出されないことから、ラット心筋とは異なりマウス心筋では生理的な条件ではRIP1の蛋白発現が低く、RIP1依存性のネクロネクロプトーシスを起こしにくい状態にあると推察された。

1.坏死性凋亡信号引起的 MLKL 核转位与坏死性凋亡之间的关系：使用 H9c2 细胞进行的研究阐明了在 δ-肌聚糖缺陷小鼠（心肌病模型小鼠）中观察到的磷酸化 MLKL 核转位的重要性。因此，在坏死性凋亡信号激活后，磷酸化的MLKL会随着时间的推移通过Ran/importin途径转位至细胞核，其核转位依赖于RIP1活性，MLKL的核输出信号为280-284 MLKL存在于氨基酸区域，该区域的突变已被证明会增加核磷酸化 MLKL 水平并增加细胞死亡。核磷酸化 MLKL 引起的细胞死亡不依赖于 RIP1 或 RIP3 的活性。这些结果表明，核磷酸化 MLKL 是一种独立于细胞质磷酸化 MLKL 的促进坏死性凋亡的机制，细胞质磷酸化 MLKL 会诱导细胞膜损伤。 2.由于坏死性凋亡信号的激活，心肌介导版本的形态变化以及介导版本的组成蛋白的变化：评估针对结蛋白、桥粒格雷林-2、钙粘蛋白、RIP1 和 RIP3 的多种抗体的特异性，这些抗体可用于免疫组织化学该研究在多个小鼠器官中进行，包括心肌。此外，通过对在L929细胞中诱导坏死性凋亡的样品进行Western印迹分析抗RIP1和抗RIP3抗体的特异性。在检查的16种抗体中，排除了11种已确认特异性问题的抗体，目前正在分析5种类型的组织免疫染色特异性。尽管正常心肌组织没有被抗RIP1抗体染色，但与大鼠心肌不同，在生理条件下，RIP1蛋白在小鼠心肌中表达较低，表明其处于RIP1依赖性。说明他不太可能发生性坏死性凋亡。

项目成果

Enhanced nuclear localization of MLKL promotes necroptosis of cardiomyocytes and predicts prognosis in dilated cardiomyopathy.

MLKL 增强的核定位可促进心肌细胞坏死性凋亡并预测扩张型心肌病的预后。

• 发表时间: 2023
• 作者: YanoT;Fujita Y;Ino S;Ohwada W;Kouzu H;Kuno A;Tanno M;Furuhashi M;Miura T.
• 通讯作者: Miura T.

Role of Erythropoiesis-Stimulating Agents in Cardiovascular Protection in CKD Patients: Reappraisal of Their Impact and Mechanisms

• DOI: 10.1007/s10557-022-07321-3
• 发表时间: 2022-02-12
• 期刊: CARDIOVASCULAR DRUGS AND THERAPY
• 影响因子: 3.4
• 作者: Miura，Tetsuji;Sato，Tatsuya;Nishizawa，Keitaro
• 通讯作者: Nishizawa，Keitaro

Nuclear translocation of MLKL enhances necroptosis by a RIP1/RIP3-independent mechanism in H9c2 cardiomyoblasts.

MLKL 的核转位通过 RIP1/RIP3 独立机制增强 H9c2 心肌细胞中的坏死性凋亡。

• DOI: 10.1016/j.jphs.2022.12.009
• 发表时间: 2023
• 期刊: Journal of Pharmacological Sciences
• 影响因子: 3.5
• 作者: Ino S;Yano T;Kuno A;Tanno M;Kouzu H;Sato T;Yamashita T;Ohwada W;Osanami A;Ogawa T;Toda Y;Shimizu M;Miura T.
• 通讯作者: Miura T.

Involvement of necroptosis in contrast-induced nephropathy in a rat CKD model

• DOI: 10.1007/s10157-021-02048-1
• 发表时间: 2021-03
• 期刊: Clinical and Experimental Nephrology
• 影响因子: 2.3
• 作者: Satoru Shibata;Norihito Moniwa;A. Kuno;Ayumu Kimura;W. Ohwada;H. Sugawara;Yufu Gocho;Marenao Tanaka;T. Yano;M. Furuhashi;M. Tanno;T. Miki;T. Miura