超音波診断装置を用いて脂肪由来幹細胞を経時的に複数回投与した自家神経移植の研究

使用超声诊断设备多次施用脂肪干细胞进行自体神经移植的研究

基本信息

批准号：
21K07292
负责人：
多田薫
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07292/
关键词：
末梢神経脂肪幹細胞細胞シート

项目摘要

本研究では超音波診断装置を用いて自家神経移植片にADSCsを投与し、適切な投与方法を明らかにすることを目標にしていた。しかし、この手法では自家神経移植の治療成績を向上させることができなかったため、ADSCsの投与方法について再検討した。文献検索の結果、ADSCsを局所投与ではなく尾静脈から全身投与する方法が有効であると考え、令和4年度からはADSCsの細胞懸濁液を経静脈的に全身投与する方法に関して検討を進めている。ADSCsはラット鼠径部から2gの脂肪組織を採取して作製し、その後得られたADSCsを500μLのリン酸緩衝生理食塩水(PBS)に混和して細胞懸濁液を作製した。ラットの左坐骨神経を15mm切除した後に翻転させて縫合する自家神経移植モデルを作製し、移植時に尾静脈からPBSの投与を行った対照群と、ADSCsの細胞懸濁液の投与を行った幹細胞群を作製した。モデル作製後12週時にSciatic function index (SFI)、Autotomy score、前脛骨筋の筋湿重量、前脛骨筋の複合筋活動電位の遠位潜時と振幅に関して評価した。その結果、SFIおよびAutotomy score、振幅に関しては2群間に有意差を認めなかったが、前脛骨筋の筋湿重量、遠位潜時に関しては幹細胞群で有意に良好な結果が得られていた。また、幹細胞群の成績は、以前当科で施行したADSCsの細胞シートを局所投与した群の成績とほぼ同等であることを確認した。令和5年度は治療成績を向上させた理由について評価するため、モデル作成後に標識した幹細胞を全身投与し、幹細胞の生存期間や生体内分布について評価する。また、自家神経移植片や後根神経節などを採取して軸索や神経細胞体の評価や、各種遺伝子の発現について評価する。さらに治療成績を向上させる方法として、細胞懸濁液の濃度や投与回数に関しても検討する。

在这项研究中，我们的目的是使用超声诊断装置将 ADSC 移植到自体神经移植物上，并阐明适当的给药方法。然而，这种方法未能改善自体神经移植的治疗效果，因此我们重新考虑了ADSCs的给药方法。通过文献检索，我们认为通过尾静脉全身施用 ADSC 比局部施用更有效，从 2020 财年开始，我们一直在研究通过静脉内全身施用 ADSC 细胞悬浮液的方法。通过从大鼠腹股沟区域收集2g脂肪组织来制备ADSC，然后将获得的ADSC与500μL磷酸盐缓冲盐水(PBS)混合以制备细胞悬液。建立自体神经移植模型，将大鼠左侧坐骨神经切除15mm，然后翻转并缝合，对照组在移植时从尾静脉接受PBS，并获得ADSCs细胞悬液。创建了干细胞群。模型创建12周后，评估坐骨功能指数（SFI）、自切评分、胫骨前肌的肌肉湿重以及胫骨前肌复合肌肉动作电位的远端潜伏期和振幅。结果，两组在 SFI、Autotomy 评分和振幅方面没有显着差异，但干细胞组在胫骨前肌湿重和远端潜伏期方面获得了明显更好的结果。另外，我们确认干细胞组的结果与我们科室之前进行的ADSCs细胞片局部给药组的结果几乎相同。 2020财年，为了评估治疗效果改善的原因，将在模型创建后系统地施用标记干细胞，并评估干细胞的存活期和生物分布。此外，还将收集自体神经移植物和背根神经节，以评估轴突和神经细胞体，以及各种基因的表达。此外，我们还将检查细胞悬液的浓度和给药次数，作为改善治疗效果的一种方法。